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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR用10ul反应成吗？
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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 荧光定量PCR用10ul反应成吗？

荧光定量PCR有人用过10ul反应吗？会不会太少了呀，我担心蒸发干了，有人用过10ul反应吗？多谢了。手机没法悬赏金币，电脑上的时候追加悬赏金币。


另外，这是我今天刚做的10ul体系的结果，不行啊，不知道是体系的问题还是试剂的问题呀我的cDNA和酶都只冻融过一次，在4℃融化之后用的，在冰上配制的混合液，在冰上加的样。大侠帮忙分析是哪儿的原因啊！


[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

[ Last edited by zhang8826857 on 2012-7-19 at 15:20 ]
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1楼 2012-07-17 23:36:04
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhang8826857: 金币+3, 谢谢 2012-09-21 16:26:07
我们这边都是用10uL的。我最早用20uL，后来看旁边几家课题组都是10uL，也换成10uL的了。耗材方面，我们的是AB的机器没办法只能用原厂耗材，其他实验室都用Axygen的耗材。
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19楼2012-07-19 15:46:56
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我常用的体系是这样的（Takara的试剂盒）：

SYBR Premix Ex Taq (2X)        5 μL
Primer 1 (2 μM)                       1 μL
Primer 2 (2 μM)                       1 μL
cDNA (相当于50 ng RNA）      1 μL
水                                            2 μL
---------------------------------------------------------
Total                                      10 μL

我们普通PCR时引物是10 μM的，为了使体积不至于太小，做定量PCR的引物我就用2 μM的了。cDNA的用量可根据需要再调整。
另外，ROX是事先加入整管SYBR Premix Ex Taq里面的，体积很小就忽略了。

[ Last edited by 西瓜 on 2012-7-19 at 16:07 ]
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20楼2012-07-19 16:03:19
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