应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR用10ul反应成吗？
221/1返回列表
查看: 4339  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 荧光定量PCR用10ul反应成吗？

荧光定量PCR有人用过10ul反应吗？会不会太少了呀，我担心蒸发干了，有人用过10ul反应吗？多谢了。手机没法悬赏金币，电脑上的时候追加悬赏金币。


另外，这是我今天刚做的10ul体系的结果，不行啊，不知道是体系的问题还是试剂的问题呀我的cDNA和酶都只冻融过一次，在4℃融化之后用的，在冰上配制的混合液，在冰上加的样。大侠帮忙分析是哪儿的原因啊！


[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

[ Last edited by zhang8826857 on 2012-7-19 at 15:20 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-07-17 23:36:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hxsm

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-19 15:21:31
zhang8826857: 金币+5, 谢谢 2012-09-21 16:24:54
曾经大规模数据都是用10的，没有一点问题，但是有时候也要看仪器和你的耗材，我整个流程几乎都是进口耗材，包括RNA的很多都是进口耗材，速度很快，这样的我5的体系也用过，其实没有什么问题的。。。移液枪，我是采用了一套全新的移液枪，用于整个实验流程。。。
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2012-07-19 08:56:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

love_st

金虫 (著名写手)
应该问题不大
回复此楼
2楼2012-07-18 08:37:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhang8826857: 金币+5, 谢谢 2012-09-21 16:25:02
做过15的，10的没做过，感觉太少了吧，会不会加样误差大啊
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-18 17:03:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhang8826857: 金币+2, 谢谢 2012-09-21 16:25:13
没问题，我以前做过。要用把好一点的移液枪，保证加样准确。
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-18 17:28:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Rick001

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhang8826857: 金币+2, 谢谢 2012-09-21 16:25:19
太少了应该会影响复孔之间的差距以及重现性。
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-18 18:33:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenye.judy

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhang8826857: 金币+5, 谢谢 2012-09-21 16:25:26
你的PCR管子和仪器只要配套，就没问题，我做过！
赞一下 回复此楼
6楼2012-07-18 19:34:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupac225

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我觉得pcr的体系最好还是20ul的体系最好，误差较小，你这么做事为了节约试剂吗？没有必要的，实验结果最重要。
赞一下 回复此楼
9楼2012-07-18 22:07:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

328533973

金虫 (正式写手)
有点少了，一般20以上
赞一下 回复此楼
10楼2012-07-18 22:38:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bus1010

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhang8826857: 金币+5, 谢谢 2012-09-21 16:25:43
我们室用的12.5ul反应体积。10ul体系+2.5模板，与25ul（20+5）比对过，没问题
赞一下 回复此楼
12楼2012-07-19 00:20:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

webmasterone752

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhang8826857: 金币+3, 谢谢 2012-09-21 16:25:49
我做的是15的，没问题。
实验室也有人做10的，保证加样准确就没问题。
赞一下 回复此楼
13楼2012-07-19 08:28:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhcosa

金虫 (小有名气)
做过对比，木有问题～
赞一下 回复此楼
15楼2012-07-19 13:32:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbwalkman

木虫 (小有名气)
应该还好，别太少了吧
赞一下 回复此楼
16楼2012-07-19 14:44:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanzongwei

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
17楼2012-07-19 14:56:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cll881125

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们做的荧光PCR都是20以上的，做过25、30、40、50,但是没做过10的体系，25的体系跑完后还可以测序的。
赞一下 回复此楼
18楼2012-07-19 15:37:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhang8826857: 金币+3, 谢谢 2012-09-21 16:26:07
我们这边都是用10uL的。我最早用20uL，后来看旁边几家课题组都是10uL，也换成10uL的了。耗材方面，我们的是AB的机器没办法只能用原厂耗材，其他实验室都用Axygen的耗材。
赞一下 回复此楼
19楼2012-07-19 15:46:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我常用的体系是这样的（Takara的试剂盒）：

SYBR Premix Ex Taq (2X)        5 μL
Primer 1 (2 μM)                       1 μL
Primer 2 (2 μM)                       1 μL
cDNA (相当于50 ng RNA）      1 μL
水                                            2 μL
---------------------------------------------------------
Total                                      10 μL

我们普通PCR时引物是10 μM的，为了使体积不至于太小，做定量PCR的引物我就用2 μM的了。cDNA的用量可根据需要再调整。
另外，ROX是事先加入整管SYBR Premix Ex Taq里面的，体积很小就忽略了。

[ Last edited by 西瓜 on 2012-7-19 at 16:07 ]
赞一下 回复此楼
20楼2012-07-19 16:03:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

austin2008

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhang8826857: 金币+3, 谢谢 2012-09-21 16:26:26
用ABI的机器，384孔板做10 uL体系很好的，没啥问题，注意实验的细节，贴膜之后挥发性的问题影响很小
赞一下 回复此楼
21楼2012-07-20 08:38:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

84146922

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhang8826857: 金币+3, 谢谢 2012-09-21 16:26:37
不会，本人曾经试过10微升体系，没有问题，依然稳定
赞一下 回复此楼
22楼2012-07-20 11:43:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
郑克宁7楼
2012-07-18 20:06   回复  
zhengkning8楼
2012-07-18 20:39   回复  
学艺不精11楼
2012-07-18 22:53   回复  
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhang8826857 的主题更新
221/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 313求调剂 +5 余摆摆是大哥 2026-04-11 5/250 2026-04-12 10:34 by 猪会飞
[基金申请] 山东省基金2026 +5 jerry681 2026-04-08 6/300 2026-04-12 08:33 by kudofaye
[考研] 290求调剂 +13 luoziheng 2026-04-10 13/650 2026-04-11 23:15 by labixiaoqiao
[教师之家] 请问地理、遥感方面，可以做哪些横向项目啊，纵向完不成考核啊 +3 锦衣卫寒战 2026-04-07 5/250 2026-04-11 20:51 by 豫椒
[考研] 296求调剂 +6 汪！？！ 2026-04-09 6/300 2026-04-11 11:25 by zhq0425
[考研] 调剂 +4 电气300求调剂不 2026-04-08 7/350 2026-04-11 10:44 by 紫曦紫棋
[考研] 283求调剂，工科！ +12 苏打水7777 2026-04-08 12/600 2026-04-11 10:28 by 逆水乘风
[考研] 一志愿985机械学硕380求调剂 +5 关关雎鸠10 2026-04-11 5/250 2026-04-11 10:10 by 知念。A
[考研] 化学工程与技术324调剂 +23 孙常华 2026-04-09 25/1250 2026-04-11 00:07 by 骑牛渡寒江
[考研] 考研调剂 +26 硕星赴 2026-04-09 27/1350 2026-04-10 22:24 by 猪会飞
[考研] 0858求调剂 5+5 Gky09300550， 2026-04-10 8/400 2026-04-10 19:13 by chemisry
[考研] 调剂申请086000一志愿西北农林科技大学生物与医药320分-本科齐鲁工业大学 +3 美美女士 2026-04-09 3/150 2026-04-10 10:31 by liuhuiying09
[考研] 070300化学 求调剂 +13 73372112 2026-04-08 13/650 2026-04-09 20:22 by maddjdld
[考研] 材料工程调剂 +12 小刘同学吖吖 2026-04-06 13/650 2026-04-09 17:07 by luoyongfeng
[考研] 085400电子信息类（川大控制工程）求调剂可跨专业 求老师联系 +3 626776879 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:05 by 猪会飞
[考研] 349学科化学045106求调剂，化学类都可以 +8 保好懂懂 2026-04-08 8/400 2026-04-09 14:03 by xulei3024
[考研] 086000生物与医药调剂 +7 awwwwwooooo 2026-04-09 7/350 2026-04-09 13:31 by 北极159263
[考研] 化工学硕 285求调剂 +26 Wisjxn 2026-04-07 26/1300 2026-04-08 14:42 by screening
[考研] 307求调剂 +3 Youth@@ 2026-04-07 3/150 2026-04-07 22:00 by hemengdong
[考研] 调剂 +4 mcbbc 2026-04-06 5/250 2026-04-07 12:33 by upczlm1989
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭