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[交流]
荧光定量PCR用10ul反应成吗？
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荧光定量PCR有人用过10ul反应吗？会不会太少了呀，我担心蒸发干了，有人用过10ul反应吗？多谢了。手机没法悬赏金币，电脑上的时候追加悬赏金币。 另外，这是我今天刚做的10ul体系的结果，不行啊，不知道是体系的问题还是试剂的问题呀  我的cDNA和酶都只冻融过一次，在4℃融化之后用的，在冰上配制的混合液，在冰上加的样。大侠帮忙分析是哪儿的原因啊！ [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] [ Last edited by zhang8826857 on 2012-7-19 at 15:20 ] |
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starseacow
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yanzongwei
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17楼2012-07-19 14:56:02
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19楼2012-07-19 15:46:56
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我常用的体系是这样的（Takara的试剂盒）： SYBR Premix Ex Taq (2X) 5 μL Primer 1 (2 μM) 1 μL Primer 2 (2 μM) 1 μL cDNA (相当于50 ng RNA） 1 μL 水 2 μL --------------------------------------------------------- Total 10 μL 我们普通PCR时引物是10 μM的，为了使体积不至于太小，做定量PCR的引物我就用2 μM的了。cDNA的用量可根据需要再调整。 另外，ROX是事先加入整管SYBR Premix Ex Taq里面的，体积很小就忽略了。 [ Last edited by 西瓜 on 2012-7-19 at 16:07 ] |
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