24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)

应助: 6 (幼儿园)
贵宾: 1.049
金币: 8847.6
帖子: 2137
在线: 278.8小时
虫号: 1397074

[交流] 荧光定量PCR用10ul反应成吗？

荧光定量PCR有人用过10ul反应吗？会不会太少了呀，我担心蒸发干了，有人用过10ul反应吗？多谢了。手机没法悬赏金币，电脑上的时候追加悬赏金币。

另外，这是我今天刚做的10ul体系的结果，不行啊，不知道是体系的问题还是试剂的问题呀

我的cDNA和酶都只冻融过一次，在4℃融化之后用的，在冰上配制的混合液，在冰上加的样。大侠帮忙分析是哪儿的原因啊！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

[ Last edited by zhang8826857 on 2012-7-19 at 15:20 ]

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

荧光定量PCR的反应板和反应板的封膜大家用的哪个厂家的呀？已经有7人回复
定量PCR读取荧光值的步骤需要保持多长时间？已经有12人回复
荧光定量PCR。。。求助求助已经有17人回复
荧光定量PCR 已经有12人回复
荧光定量PCR的模板浓度已经有12人回复
荧光定量PCR(相对定量)的分析结果2-△△Ct怎么看呀? 已经有31人回复
【求助/交流】荧光定量PCR与半定量的RT－PCR在设计引物时有什么区别？已经有8人回复
【求助/交流】荧光定量pcr求助已经有11人回复
【求助/交流】求助，关于荧光定量PCR问题已经有5人回复
【分享】荧光定量PCR简介已经有13人回复
【求助/交流】关于做荧光定量pcr的模板问题已经有12人回复
【分享】荧光定量PCR实验指南（二）已经有12人回复
【分享】荧光定量PCR实验指南（一）已经有20人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2012-07-17 23:36:04

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

我常用的体系是这样的（Takara的试剂盒）：

SYBR Premix Ex Taq (2X)       5 μL
Primer 1 (2 μM)                      1 μL
Primer 2 (2 μM)                      1 μL
cDNA (相当于50 ng RNA）    1 μL
水                                           2 μL
---------------------------------------------------------
Total                                     10 μL

我们普通PCR时引物是10 μM的，为了使体积不至于太小，做定量PCR的引物我就用2 μM的了。cDNA的用量可根据需要再调整。
另外，ROX是事先加入整管SYBR Premix Ex Taq里面的，体积很小就忽略了。

[ Last edited by 西瓜 on 2012-7-19 at 16:07 ]