24小时热门版块排行榜    

查看: 5080  |  回复: 21
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)


[交流] 荧光定量PCR用10ul反应成吗?

荧光定量PCR有人用过10ul反应吗?会不会太少了呀,我担心蒸发干了,有人用过10ul反应吗?多谢了。手机没法悬赏金币,电脑上的时候追加悬赏金币。


另外,这是我今天刚做的10ul体系的结果,不行啊,不知道是体系的问题还是试剂的问题呀我的cDNA和酶都只冻融过一次,在4℃融化之后用的,在冰上配制的混合液,在冰上加的样。大侠帮忙分析是哪儿的原因啊!


[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

[ Last edited by zhang8826857 on 2012-7-19 at 15:20 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我常用的体系是这样的(Takara的试剂盒):

SYBR Premix Ex Taq (2X)        5 μL
Primer 1 (2 μM)                       1 μL
Primer 2 (2 μM)                       1 μL
cDNA (相当于50 ng RNA)      1 μL
水                                            2 μL
---------------------------------------------------------
Total                                      10 μL

我们普通PCR时引物是10 μM的,为了使体积不至于太小,做定量PCR的引物我就用2 μM的了。cDNA的用量可根据需要再调整。
另外,ROX是事先加入整管SYBR Premix Ex Taq里面的,体积很小就忽略了。

[ Last edited by 西瓜 on 2012-7-19 at 16:07 ]
20楼2012-07-19 16:03:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhang8826857: 金币+5, 谢谢 2012-09-21 16:25:02
做过15的,10的没做过,感觉太少了吧,会不会加样误差大啊
3楼2012-07-18 17:03:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhang8826857: 金币+2, 谢谢 2012-09-21 16:25:13
没问题,我以前做过。要用把好一点的移液枪,保证加样准确。
4楼2012-07-18 17:28:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Rick001

铁杆木虫 (职业作家)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhang8826857: 金币+2, 谢谢 2012-09-21 16:25:19
太少了应该会影响复孔之间的差距以及重现性。
5楼2012-07-18 18:33:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:42 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:39 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:32 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:08 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:05 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:53 by XgCC8uTcwILl
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:50 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 6/300 2026-09-27 05:42 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 5/250 2026-09-25 11:19 by yhq9807
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 7/350 2026-09-25 11:18 by yhq9807
[硕博家园] 上海工程技术大学 激光智能制造课题组 2027级博士研究生招生 +4 oxidpl 2026-09-20 6/300 2026-09-24 20:40 by oxidpl
[教师之家] 课题组招2027级博士 上海工程技术大学 激光智能制造方向 +4 oxidpl 2026-09-20 6/300 2026-09-24 20:37 by oxidpl
[基金申请] 师弟论文见刊大半年才想起来申请专利,还能抢救一下吗? +4 13108017953 2026-09-21 4/200 2026-09-24 10:06 by kudofaye
[有机交流] 有机合成以后会不会被AI改变?做科研的虫友怎么看 +5 zapen 2026-09-20 8/400 2026-09-23 17:21 by tianxiaoxian
信息提示
请填处理意见