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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR问题分析
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Allanflying

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR问题分析 已有3人参与

各位大虾，
    小弟日前反转录得到了一批cDNA,想做实时定量PCR，第一步PCR出来了28SrRNA的内参基因条带，之后设计了10个基因的10对引物，包括属内特异引物，也包括简并引物，但是均没有出现想要的目的条带，郁闷之极，是什么原因啊？
     出来内参基因是不是意味着反转录一定成功了啊？
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1楼 2011-03-12 20:42:55
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
个人觉得内参出来，应该表明反转录的成功
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风雪夜归人
2楼2011-03-12 21:21:18
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
实时定量的引物是很难设计的
得看运气
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3楼2011-03-13 00:09:49
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Allanflying

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 阿修罗Axuro at 2011-03-13 00:09:49:
实时定量的引物是很难设计的
得看运气

我知道啊，所以我设计了10对引物，还包括简并，巢式PCR引物，可是没想到这么多都没有出来，全是引物二聚体，我崩溃啊
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4楼2011-03-13 21:27:34
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Allanflying

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wqj1988926 at 2011-03-12 21:21:18:
个人觉得内参出来，应该表明反转录的成功

如果是模板量低或组织本身表达目的基因很低的原因的话，应该怎么办？
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5楼2011-03-13 21:30:31
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
加入一些诱导物来刺激细胞，从而是目的基因表达提高
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风雪夜归人
6楼2011-03-14 11:14:33
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