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Allanflying

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR问题分析 已有3人参与

各位大虾,
    小弟日前反转录得到了一批cDNA,想做实时定量PCR,第一步PCR出来了28SrRNA的内参基因条带,之后设计了10个基因的10对引物,包括属内特异引物,也包括简并引物,但是均没有出现想要的目的条带,郁闷之极,是什么原因啊?
     出来内参基因是不是意味着反转录一定成功了啊?
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wqj1988926

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
个人觉得内参出来,应该表明反转录的成功
风雪夜归人
2楼2011-03-12 21:21:18
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
实时定量的引物是很难设计的
得看运气
3楼2011-03-13 00:09:49
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Allanflying

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 阿修罗Axuro at 2011-03-13 00:09:49:
实时定量的引物是很难设计的
得看运气

我知道啊,所以我设计了10对引物,还包括简并,巢式PCR引物,可是没想到这么多都没有出来,全是引物二聚体,我崩溃啊
4楼2011-03-13 21:27:34
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Allanflying

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by wqj1988926 at 2011-03-12 21:21:18:
个人觉得内参出来,应该表明反转录的成功

如果是模板量低或组织本身表达目的基因很低的原因的话,应该怎么办?
5楼2011-03-13 21:30:31
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wqj1988926

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
加入一些诱导物来刺激细胞,从而是目的基因表达提高
风雪夜归人
6楼2011-03-14 11:14:33
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