应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
81/1返回列表
查看: 1017  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

夏尔list

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】PCR的问题

扩一个基因，1314bp，GC含量约有63%。
25微升体系如下：引物 0.5/0.5
                       10乘buffer 2.5
                            dNTP         0.5
                            Taq酶        0.5
                        cDNA（模板）1
                           DMSO          1
                           ddH2O       18.5

扩增设计：95℃         5min
                 95℃          45s
                 58、63℃   45s
                 72℃          1min30s
                 72℃           10min
                  4℃            hold
28个循环
扩了三次没有扩出来
GC含量高，一会准备换个GC buffer，但是师姐说那个没有什么用处。
请教各位大侠~~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-03-01 15:35:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xingxing342

银虫 (小有名气)
★
夏尔list(金币+1): 谢谢 2011-03-01 19:03:32
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-01 19:49:04
1.退火温度，引物量，酶量等做几个梯度，优化一下。
2.模板在提纯一些
3.换换PCR仪
还不出的话，可能是引物设计的不好吧。你加DMSO就是说你的东西不好P，在好好弄弄引物吧。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-03-01 15:51:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
夏尔list(金币+2): 谢谢 2011-03-01 19:04:54
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-01 19:49:11
63%的GC还不算太高
撤掉DMSO看看，DMSO不一定都是增强剂，有可能抑制PCR反应
另外，换个活力好的酶吧
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-03-01 18:50:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏尔list

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-01 18:50:09:
63%的GC还不算太高
撤掉DMSO看看，DMSO不一定都是增强剂，有可能抑制PCR反应
另外，换个活力好的酶吧

我查了文献说ＤＭＳＯ在６％——１３％时效果最好，低于４％或者高于２０％就不行了，２５微升体系１微升的ＤＭＳＯ，差不多是４％，那么应该再增加ＤＭＳＯ呀。。。
嗯，我再用高保真酶扩一下，谢谢
赞一下 回复此楼
4楼2011-03-01 19:11:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

roomofxw

木虫 (正式写手)
★
夏尔list(金币+1): 谢谢~ 2011-03-01 19:39:57
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-01 19:49:25
GC buffer还是有用的
我P过GC 72%的，只有加了GC buffer才行
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-03-01 19:30:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

翱宇

禁虫 (正式写手)
★
lstt09nk(金币+1): 鼓励新斑斑~ 2011-03-01 20:03:54
夏尔list(金币+1): 谢谢 2011-03-01 20:06:29
退火温度太高了，假如做的是温度梯度，试试50-60度吧，DMSO在5%就可以，为何那么多呢！这玩意多了也不好的。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-03-01 20:00:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏尔list

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 翱宇 at 2011-03-01 20:00:15:
退火温度太高了，假如做的是温度梯度，试试50-60度吧，DMSO在5%就可以，为何那么多呢！这玩意多了也不好的。

Primer5设计的引物温度是65摄氏度，已经降了很多了。。。片段起始区GC含量就很高，没办法额
赞一下 回复此楼
7楼2011-03-01 20:06:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wlsky24

新虫 (正式写手)
夏尔list(金币+2): 嗯，谢谢~~ 2011-03-01 21:30:40
换个高保真酶试试。
赞一下 回复此楼
8楼2011-03-01 21:28:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 夏尔list 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 285求调剂 +3 mapmath 2026-04-06 3/150 2026-04-06 13:53 by ajpv风雷
[考研] 0854求调剂 +4 assdll 2026-04-05 4/200 2026-04-06 12:29 by 中飞院空管学院�
[考研] 281求调剂 +8 椰子蘑菇 2026-04-06 8/400 2026-04-06 10:38 by 蓝云思雨
[考研] 070300化学学硕311分求调剂 +11 梁富贵险中求 2026-04-04 13/650 2026-04-06 07:24 by houyaoxu
[考研] 找调剂 +10 楚乔乔 2026-04-01 10/500 2026-04-05 22:19 by syh9288
[考研] 生物学308分求调剂（一志愿华东师大） +8 相信必会光芒万� 2026-04-05 10/500 2026-04-05 12:19 by Hdyxbekcb
[考研] 生物工程求调剂 +6 喜欢还是不甘心 2026-04-05 6/300 2026-04-05 10:28 by 唐沐儿
[考研] 材料化工306分找合适调剂 +14 沧海轻舟e 2026-04-04 14/700 2026-04-05 09:53 by 朱云虎202
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +5 崔wj 2026-03-31 5/250 2026-04-04 19:45 by 1753564080
[考研] 26调剂 086003 +6 失活的细胞 2026-04-04 6/300 2026-04-04 09:50 by zhangdingwa
[考研] 0856调剂 +8 曲听筠 2026-03-30 8/400 2026-04-04 08:46 by tianyyysss
[考研] 一志愿重庆大学085404，总分314分，求调剂 +4 zf83hn 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:25 by 啵啵啵0119
[考研] 建环，能源，土木老师路过看一看！！！ +5 嘿嘿uu 2026-04-01 5/250 2026-04-03 11:47 by znian
[考研] 312 化工或制药调剂 +8 小小墨123 2026-04-02 9/450 2026-04-03 09:12 by zhouxiaoyu
[考研] 一志愿厦门大学化学工程（专硕）-数二英二406分-求调剂 +5 厦大化工 2026-04-01 5/250 2026-04-02 10:03 by jp9609
[考研] 377求调剂 +3 RASKIN 2026-04-02 3/150 2026-04-02 09:45 by zzchen2000
[考研] 江苏科技大学招材料研究生 +4 Su032713. 2026-04-01 5/250 2026-04-01 22:03 by cccchenso
[考研] 303分 0807学硕求调剂 +3 TYC3632 2026-04-01 3/150 2026-04-01 19:24 by lwk2004
[考研] 349求调剂 +6 吃的不少 2026-04-01 6/300 2026-04-01 17:55 by JYD2011
[考研] 求调剂：一志愿：南京大学 专业：0705 总分320 ，本科985，四六级已过 +3 lfy760306 2026-03-31 3/150 2026-04-01 01:57 by Creta
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭