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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR延伸问题
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fykxy_206

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR延伸问题 已有8人参与

在PCR循环中
94预变性
94变性
55退火
72延伸
72延伸10min
这个延伸10min是为什么？是为了更好的延伸吗？能用理论上的东西解释一下吗？
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1楼 2010-08-18 16:27:57
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 2010-08-18 22:00:39
在做克隆级的PCR的时候，因为Taq酶的活性会随着循环的增加而下降，而且在每一轮循环的过程中部分片段可能没有完全扩增完Taq酶就脱落了
因此为了保证获得大量的完整目的产物，就加了个72℃补延伸，把残余的没反应完的给弄完整了~~
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2楼2010-08-18 16:44:47
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phoenix0

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1):鼓励交流，头像不错！ 2010-08-18 22:00:52
这是最后一个循环，把所有的序列恢复成双螺旋结构，以便检测
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3楼2010-08-18 18:17:42
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jia1012428

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
-同意楼上观点
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4楼2010-08-18 20:01:38
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是保证所有片段扩增完全，但这并不是为了便于检测，其实在延伸那一步我们设定的时间已经基本可以完全扩增了，即使有没扩增完全的极少量片段对检测结果也不会产生多大的影响，主要是影响以后的连接反应
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
5楼2010-08-18 23:07:46
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2010-08-18 23:07:46:
是保证所有片段扩增完全，但这并不是为了便于检测，其实在延伸那一步我们设定的时间已经基本可以完全扩增了，即使有没扩增完全的极少量片段对检测结果也不会产生多大的影响，主要是影响以后的连接反应

完全同意这个观点
二楼的观点应该是存在问题的
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6楼2010-08-18 23:19:15
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-08-18 23:19:15:

完全同意这个观点
二楼的观点应该是存在问题的

呵呵，英雄所见略同！
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
7楼2010-08-18 23:25:06
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没好好读我的原话算~
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8楼2010-08-19 00:00:21
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fykxy_206

木虫 (正式写手)
我在书中查到的：
PCR最后的72度，5或10min延伸的时间，这样才能够有相当多的PCR产物在末端带有A附加碱基，才能保证较高的链接效率。
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9楼2010-08-19 08:39:01
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wmq682

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
把没延伸到末端的延伸完整
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10楼2010-08-19 08:43:18
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