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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR延伸问题
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
二楼是对的
三楼的观点有点问题
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11楼2010-08-19 08:59:03
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-08-19 00:00:21:
没好好读我的原话算~

也许你说的也对，不过我们觉得没反应完的是极少的，不会太影响检测，但这个步骤对下一步的连接反应影响就相对大一些，主要是获得更多的带A的片段

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-8-19 at 23:02 ]
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12楼2010-08-19 22:45:41
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-08-19 22:45:41:

也许你说的也对，不过我们觉得没反应完的是极少的，不会太影响检测，但这个步骤对下一步的连接反应影响就相对大一些，主要是获得更多的带A的片段

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-8-19 at 23:02 ]

我的原话是克隆级PCR，也就是后面是用于做克隆的，检测的话我从来就不做补延伸

带不带A，其实假设扩增完整片段的效率一直很高，那么片段都应该很完整而且都带A，我想在瞬间那么0.0x秒之内我相信不会少带那个A这一个碱基而片段都完整。合理的解释应该是，随着循环数的增加，产生不完整片段的数量也会越来越多，可能就差后面那十来个几十个碱基没有延伸完就over了，所以补充延伸的目的就是为了把这些片段给弄完整
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13楼2010-08-19 23:06:49
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