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fykxy_206

木虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】PCR延伸问题已有8人参与

在PCR循环中
94预变性
94变性
55退火
72延伸
72延伸10min
这个延伸10min是为什么？是为了更好的延伸吗？能用理论上的东西解释一下吗？

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1楼 2010-08-18 16:27:57

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三磷酸腺苷

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引用回帖:

Originally posted by yujiaping1 at 2010-08-19 22:45:41:

也许你说的也对，不过我们觉得没反应完的是极少的，不会太影响检测，但这个步骤对下一步的连接反应影响就相对大一些，主要是获得更多的带A的片段

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-8-19 at 23:02 ]

我的原话是克隆级PCR，也就是后面是用于做克隆的，检测的话我从来就不做补延伸

带不带A，其实假设扩增完整片段的效率一直很高，那么片段都应该很完整而且都带A，我想在瞬间那么0.0x秒之内我相信不会少带那个A这一个碱基而片段都完整。合理的解释应该是，随着循环数的增加，产生不完整片段的数量也会越来越多，可能就差后面那十来个几十个碱基没有延伸完就over了，所以补充延伸的目的就是为了把这些片段给弄完整