24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2952  |  回复: 9

faile18

金虫 (小有名气)

[求助] 求助PCR反应参数设置

求助各位PCR反应过程中,各个阶段参数设置的问题,有没有一些参考依据,大致的范围都可以找到,但细节需要精确,望各位赐教!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)


【答案】应助回帖

faile18(金币+1): 2011-09-06 10:05:41
哎,目的不明确,你说的都不细,别人怎么细说
2楼2011-08-30 17:30:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

faile18

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2011-08-30 17:30:32:
哎,目的不明确,你说的都不细,别人怎么细说

不好意思,昨晚发帖发的仓促了。退火温度我是根据引物合成订单上面的温度来计算设计的。比如说我的基因大小有1000以下的,1000多的,2000多的,3000多的,这些基因的变性时间,退火时间以及延伸时间,这些应该如何设置
3楼2011-08-31 15:27:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

瓶儿花

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-08-31 17:07:16
faile18(金币+2): 2011-09-06 10:05:55
94℃ 预变性  2-5min
94℃变性     1min
50-60℃退火  1min
72℃延伸     1-2kb/min;30-35个循环
72℃延伸     5-10min
退火温度要根据引物的Tm值来确定,延伸的时间要根据扩增目的片段的大小来确定。
4楼2011-08-31 15:37:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wulishu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-09-01 13:24:50
faile18(金币+2): 2011-09-06 10:06:01
用的什么酶,参看说明书,片段长度不同时一般只需要调节延伸温度就可以

提醒你一句,无论用什么,说明书是必须要参考的
5楼2011-09-01 08:59:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wzqno

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): good 2011-09-01 18:20:02
引用回帖:
4楼: Originally posted by 瓶儿花 at 2011-08-31 15:37:11:
94℃ 预变性  2-5min
94℃变性     1min
50-60℃退火  1min
72℃延伸     1-2kb/min;30-35个循环
72℃延伸     5-10min
退火温度要根据引物的Tm值来确定,延伸的时间要根据扩增目的片段的大小来确定。

退火温度最好先做个预实验,因为基因片段比较长,可以从55-65设10或20个温度梯度,摸索一下  其他的时间参数都好说
6楼2011-09-01 09:14:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

faile18

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 瓶儿花 at 2011-08-31 15:37:11:
94℃ 预变性  2-5min
94℃变性     1min
50-60℃退火  1min
72℃延伸     1-2kb/min;30-35个循环
72℃延伸     5-10min
退火温度要根据引物的Tm值来确定,延伸的时间要根据扩增目的片段的大小来确定。

我现在看的主要是一些材料上提供的范围,主要问题是具体过程中,比如说每个参数,或大或小对产物的影响,以及哪个偏差可能影响不大,而哪一个又会影响较大。
7楼2011-09-01 19:05:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

faile18

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wulishu at 2011-09-01 08:59:24:
用的什么酶,参看说明书,片段长度不同时一般只需要调节延伸温度就可以

提醒你一句,无论用什么,说明书是必须要参考的

用的是TAKARA的Premix Ex Taq(loading dye),说明书我已经看过了,谢谢。周围的人针对于片段问题,没有提供调节延伸温度的意见
8楼2011-09-01 19:07:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wulishu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by faile18 at 2011-09-01 19:07:40:
用的是TAKARA的Premix Ex Taq(loading dye),说明书我已经看过了,谢谢。周围的人针对于片段问题,没有提供调节延伸温度的意见

不好意思,写错了,是延伸时间,一般1k bp/min
9楼2011-09-02 09:18:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xbl3688

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-09-02 18:25:04
引用回帖:
8楼: Originally posted by faile18 at 2011-09-01 19:07:40:
用的是TAKARA的Premix Ex Taq(loading dye),说明书我已经看过了,谢谢。周围的人针对于片段问题,没有提供调节延伸温度的意见

1、大概的体系前面的虫友都说得差不多了,关于退火温度我也推荐你做一个60-50的温度梯度,程序是前十个循环60℃-50℃,每个循环降一度,这十个循环的延伸时间设为45s或者60s都可以。然后再按照你分析的退火温度延伸25个循环,延伸时间为1k bp/min(片段长的话按比例增加时间);
2、延伸温度一般都使用72℃,没有问题的。
生活的乐趣在于善于发现美,学会欣赏美
10楼2011-09-02 15:30:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 faile18 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0855求调剂材料 +11 红桃灼灼 2026-04-04 12/600 2026-04-06 10:26 by 蓝云思雨
[考研] 315求调剂 +14 欣喜777 2026-04-04 15/750 2026-04-06 06:25 by houyaoxu
[考研] 一志愿北京化工085600 310分求调剂 +16 0856材料与化工3 2026-04-04 18/900 2026-04-06 01:54 by BruceLiu320
[考研] 277求调剂 数一104分 +6 瓶子PZ 2026-04-05 6/300 2026-04-05 20:38 by 啵啵啵0119
[考研] 一志愿9材料学硕297已过六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-04-04 12/600 2026-04-05 19:04 by 蓝云思雨
[考研] 22408 总分320,一篇论文二作,两个国三,求调剂 +3 Leomulufu 2026-04-04 5/250 2026-04-05 19:04 by chongya
[考研] 298求调剂 +7 manman511 2026-04-05 7/350 2026-04-05 10:29 by 唐沐儿
[考研] 一志愿郑大0705求调剂 +3 橘十一 2026-04-02 4/200 2026-04-05 00:05 by chongya
[考研] 材料求调剂 +10 呢呢妮妮 2026-04-01 10/500 2026-04-04 23:12 by 无际的草原
[考研] 0854求调剂 +4 assdll 2026-04-03 4/200 2026-04-04 22:17 by hemengdong
[考研] 求调剂 +6 朔朔话 2026-04-02 7/350 2026-04-04 19:16 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿双非085502,267分,过四级求调剂 +3 再忙也要吃饭啊 2026-04-03 3/150 2026-04-04 05:03 by gswylq
[考研] 机械专硕297 +3 Afksy 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:24 by 1753564080
[考研] 273求调剂 +20 李芷新1 2026-03-31 20/1000 2026-04-03 09:58 by linyelide
[考研] 调剂 +3 osbbx 2026-04-02 3/150 2026-04-03 07:47 by cc8418
[考研] 材料340分调剂 +7 夏夜晚风_long 2026-04-02 9/450 2026-04-02 21:20 by dongzh2009
[考研] 初试301,代码085701环境工程,本硕一致,四六级已过,有二区一作,共发表5篇论文 +6 axibli 2026-04-01 6/300 2026-04-02 13:42 by Ecowxq666!
[考研] 271求调剂 +15 勒布朗@ 2026-03-31 20/1000 2026-04-02 11:24 by Sammy2
[考研] 材料调剂 +10 Eujd1 2026-03-31 11/550 2026-04-01 11:23 by ivanqyq
[考研] 080500-315分复试调剂 +9 上岸3821 2026-03-31 9/450 2026-03-31 17:29 by 唐沐儿
信息提示
请填处理意见