应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助PCR反应参数设置
101/1返回列表
查看: 2922  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

faile18

金虫 (小有名气)

[求助] 求助PCR反应参数设置

求助各位PCR反应过程中，各个阶段参数设置的问题，有没有一些参考依据，大致的范围都可以找到，但细节需要精确，望各位赐教！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-08-30 16:48:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

faile18(金币+1): 2011-09-06 10:05:41
哎，目的不明确，你说的都不细，别人怎么细说
赞一下 回复此楼
2楼2011-08-30 17:30:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

faile18

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2011-08-30 17:30:32:
哎，目的不明确，你说的都不细，别人怎么细说

不好意思，昨晚发帖发的仓促了。退火温度我是根据引物合成订单上面的温度来计算设计的。比如说我的基因大小有1000以下的，1000多的，2000多的，3000多的，这些基因的变性时间，退火时间以及延伸时间，这些应该如何设置
赞一下 回复此楼
3楼2011-08-31 15:27:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

瓶儿花

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-08-31 17:07:16
faile18(金币+2): 2011-09-06 10:05:55
94℃ 预变性  2-5min
94℃变性     1min
50-60℃退火  1min
72℃延伸     1-2kb/min；30-35个循环
72℃延伸     5-10min
退火温度要根据引物的Tm值来确定，延伸的时间要根据扩增目的片段的大小来确定。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-08-31 15:37:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wulishu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-09-01 13:24:50
faile18(金币+2): 2011-09-06 10:06:01
用的什么酶，参看说明书，片段长度不同时一般只需要调节延伸温度就可以

提醒你一句，无论用什么，说明书是必须要参考的
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-09-01 08:59:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wzqno

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): good 2011-09-01 18:20:02
引用回帖:
4楼: Originally posted by 瓶儿花 at 2011-08-31 15:37:11:
94℃ 预变性  2-5min
94℃变性     1min
50-60℃退火  1min
72℃延伸     1-2kb/min；30-35个循环
72℃延伸     5-10min
退火温度要根据引物的Tm值来确定，延伸的时间要根据扩增目的片段的大小来确定。

退火温度最好先做个预实验，因为基因片段比较长，可以从55-65设10或20个温度梯度，摸索一下  其他的时间参数都好说
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-09-01 09:14:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

faile18

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 瓶儿花 at 2011-08-31 15:37:11:
94℃ 预变性  2-5min
94℃变性     1min
50-60℃退火  1min
72℃延伸     1-2kb/min；30-35个循环
72℃延伸     5-10min
退火温度要根据引物的Tm值来确定，延伸的时间要根据扩增目的片段的大小来确定。

我现在看的主要是一些材料上提供的范围，主要问题是具体过程中，比如说每个参数，或大或小对产物的影响，以及哪个偏差可能影响不大，而哪一个又会影响较大。
赞一下 回复此楼
7楼2011-09-01 19:05:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

faile18

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wulishu at 2011-09-01 08:59:24:
用的什么酶，参看说明书，片段长度不同时一般只需要调节延伸温度就可以

提醒你一句，无论用什么，说明书是必须要参考的

用的是TAKARA的Premix Ex Taq（loading dye），说明书我已经看过了，谢谢。周围的人针对于片段问题，没有提供调节延伸温度的意见
赞一下 回复此楼
8楼2011-09-01 19:07:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wulishu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by faile18 at 2011-09-01 19:07:40:
用的是TAKARA的Premix Ex Taq（loading dye），说明书我已经看过了，谢谢。周围的人针对于片段问题，没有提供调节延伸温度的意见

不好意思，写错了，是延伸时间，一般1k bp/min
赞一下 回复此楼
9楼2011-09-02 09:18:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xbl3688

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-09-02 18:25:04
引用回帖:
8楼: Originally posted by faile18 at 2011-09-01 19:07:40:
用的是TAKARA的Premix Ex Taq（loading dye），说明书我已经看过了，谢谢。周围的人针对于片段问题，没有提供调节延伸温度的意见

1、大概的体系前面的虫友都说得差不多了，关于退火温度我也推荐你做一个60-50的温度梯度，程序是前十个循环60℃-50℃，每个循环降一度，这十个循环的延伸时间设为45s或者60s都可以。然后再按照你分析的退火温度延伸25个循环，延伸时间为1k bp/min（片段长的话按比例增加时间）；
2、延伸温度一般都使用72℃，没有问题的。
赞一下(1人) 回复此楼
生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美
10楼2011-09-02 15:30:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 faile18 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-16 3/150 2026-03-16 10:07 by 求调剂zz
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +9 不知道叫什么！ 2026-03-15 10/500 2026-03-16 10:04 by houyaoxu
[考研] 321求调剂 +4 大米饭！ 2026-03-15 4/200 2026-03-16 08:41 by Linda Hu
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[考研] 0703化学调剂 ，六级已过，有科研经历 +4 曦熙兮 2026-03-15 4/200 2026-03-15 18:01 by JourneyLucky
[考研] 一志愿湖师大化学289求调剂 +6 XMCMM3.14159 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:28 by JourneyLucky
[考研] 0703化学调剂 +4 快乐的香蕉 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:41 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +5 邱gl 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:37 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 材料与化工085600调剂求老师收留 +9 jiaanl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 20:22 by JourneyLucky
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-12 10/500 2026-03-13 15:42 by ms629
[考研] 土木第一志愿276求调剂，科研和技能十分丰富，求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 0856化工原理 +6 z2839474511 2026-03-10 6/300 2026-03-13 10:41 by houyaoxu
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
[硕博家园] 木虫好像不热闹了，是不是？ +4 偏振片 2026-03-10 4/200 2026-03-10 09:51 by longwave
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭