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faile18

金虫 (小有名气)

[求助] 求助PCR反应参数设置

求助各位PCR反应过程中,各个阶段参数设置的问题,有没有一些参考依据,大致的范围都可以找到,但细节需要精确,望各位赐教!
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瓶儿花

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-08-31 17:07:16
faile18(金币+2): 2011-09-06 10:05:55
94℃ 预变性  2-5min
94℃变性     1min
50-60℃退火  1min
72℃延伸     1-2kb/min;30-35个循环
72℃延伸     5-10min
退火温度要根据引物的Tm值来确定,延伸的时间要根据扩增目的片段的大小来确定。
4楼2011-08-31 15:37:11
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love_st

金虫 (著名写手)


【答案】应助回帖

faile18(金币+1): 2011-09-06 10:05:41
哎,目的不明确,你说的都不细,别人怎么细说
2楼2011-08-30 17:30:32
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faile18

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2011-08-30 17:30:32:
哎,目的不明确,你说的都不细,别人怎么细说

不好意思,昨晚发帖发的仓促了。退火温度我是根据引物合成订单上面的温度来计算设计的。比如说我的基因大小有1000以下的,1000多的,2000多的,3000多的,这些基因的变性时间,退火时间以及延伸时间,这些应该如何设置
3楼2011-08-31 15:27:10
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wulishu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-09-01 13:24:50
faile18(金币+2): 2011-09-06 10:06:01
用的什么酶,参看说明书,片段长度不同时一般只需要调节延伸温度就可以

提醒你一句,无论用什么,说明书是必须要参考的
5楼2011-09-01 08:59:24
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