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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pcr体系酶与反应体系分开
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real-gold

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】pcr体系酶与反应体系分开

有什么好方法能把pcr体系中的酶与其它反应体系的成分分开或隔开，起到热启动酶的效果。最初用固体石蜡来隔开再加酶，发现操作比较麻烦，要先将石蜡熔解再等凝固，于是就想能不能固体石蜡先包埋rTaq聚合酶，但不知道要如何包埋？有没有知道的？
另一个想法就是想用琼脂糖凝胶来包埋或隔开，多少浓度的凝胶合适，怎样包埋？又是个问题。
希望在这里能找到技术支持！！！！先谢谢各位了！
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1楼 2010-12-17 10:39:10
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sutao1979

木虫 (著名写手)
★
rainwander(金币+1):估计积极参与~~~ 2010-12-18 10:59:13
rainwander:晕了。搞错字了，鼓励积极参与~~~ 2010-12-18 10:59:55
用 hot start polymerase就ok了
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2楼2010-12-18 01:11:32
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★
rainwander(金币+2):估计积极参与~~~ 2010-12-18 10:59:20
rainwander:晕了，搞错字了，鼓励积极参与~~~ 2010-12-18 11:00:10
包埋太麻烦了，直接买热启动的酶，或者买Taq酶的抗体和普通的Taq酶合用

或者加酶的时候保持体系低温，直接放进预热到94度的PCR仪里开始预变性也一样的么
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3楼2010-12-18 09:31:57
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real-gold

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-12-18 09:31:57:
包埋太麻烦了，直接买热启动的酶，或者买Taq酶的抗体和普通的Taq酶合用

或者加酶的时候保持体系低温，直接放进预热到94度的PCR仪里开始预变性也一样的么

那Taq酶的抗体和普通的Taq酶该如何混合用好，比例多少合适呢？
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4楼2010-12-19 16:53:29
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ben1147

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by real-gold at 2010-12-19 16:53:29:

那Taq酶的抗体和普通的Taq酶该如何混合用好，比例多少合适呢？

产品说明书上都有啊
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5楼2010-12-19 19:07:07
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天使托

专家顾问 (职业作家)
还是直接买你需要那种酶吧，敢问做什么实验，需要把酶隔离?
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6楼2010-12-19 20:04:13
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real-gold

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2010-12-19 20:04:13:
还是直接买你需要那种酶吧，敢问做什么实验，需要把酶隔离?

做的是产品，做试剂盒，如果能把酶与其它反应液隔开，产品的有效期会更长，非特异性也少。
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7楼2010-12-19 20:48:17
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