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夏菡小屋

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR加各种反应溶液时为什么要在冰浴环境中进行??已有11人参与

最近在做实验时,遇到了一些疑问..查了一些资料 说法不一...希望大家给个准确点的答复..嘻嘻
主要原因是因为1.Taq酶以及引物在常温下易变性而导致失活
还是 2.在常温下,引物就会在tap的作用下发生反应,发生错配产生错误的PCR产物
还是3.在冰上做能保持扩增的特异性
感觉都有道理..但是和老师交流了一下,老师只是笑了笑,让我回来查资料..不解啊..
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hkfgwww

银虫 (正式写手)

PCR哪有这么复杂的,常温下没有问题的,除非高保真酶。
微生物发酵
2楼2010-11-10 14:32:40
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

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dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-10 16:11:08
你列举的三点都是有道理的,但实际实验过程中只要在室温下操作就可以了,记得把所有东西加完后最后再把酶拿出来加上。如果你不是在做实验的时候速度奇慢,那上面的三点对实验结果基本没什么影响
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2010-11-10 14:54:48
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langduiyue

银虫 (小有名气)

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scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-11-10 23:13:31
我觉的 那是相对于以前非热激活酶而言,pcr时温度能达到90多度,常温降解 有点扯,又不是长时间放在常温下。我们一直是常温做pcr 也没见有啥不妥。    到底是不是低温更好,也请高手指点
角逐自我
4楼2010-11-10 16:11:11
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


amisking(金币+1):good! 2010-11-10 19:00:14
1、酶活性越高,半衰期越短
2、室温下,酶反应会缓慢进行,产生非特异的产物
5楼2010-11-10 16:20:28
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刘仕博

金虫 (著名写手)

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amisking(金币+2):鼓励交流! 2010-11-10 19:00:23
首先低温可以保证在加药的过程中整个体系提前反应,也会保证各个样品和药品的品质。总之低温是不会错的了~
生命在于折腾~
6楼2010-11-10 17:16:08
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bigboy123

铜虫 (小有名气)


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那都是旧社会的说法,现在是新社会,不用低温了。
供应PCR增量剂
7楼2010-11-10 18:16:35
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

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scelab(金币+1):haha 2010-11-10 23:14:19
引用回帖:
Originally posted by bigboy123 at 2010-11-10 18:16:35:
那都是旧社会的说法,现在是新社会,不用低温了。

这个得顶。
以前做PCR还到超净工作台里面做,现在都到外面了。
以前在低温,现在都室温了;
以前要蜡封,现在都不用啦。
时代进步啦。
生物资源交流QQ群:1044518333
8楼2010-11-10 19:17:43
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xuewenling

金虫 (正式写手)


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还是尽量低温吧,操作其实只要速度快点就好,最后酶在冰上加不是为了保证当次试验质量,主要是考虑酶长期保存,另外你说的3点都有道理,但是一般操作不影响
9楼2010-11-10 23:15:48
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怎么都行

银虫 (小有名气)


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冰上操作(冷启动)主要就是为了保证反应的特异性,因为taq在常温下是有活性的,容易导致引物在不该结合的地方引发反应。
10楼2010-11-10 23:37:20
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