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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR加各种反应溶液时为什么要在冰浴环境中进行??
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夏菡小屋

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR加各种反应溶液时为什么要在冰浴环境中进行?? 已有11人参与

最近在做实验时,遇到了一些疑问..查了一些资料 说法不一...希望大家给个准确点的答复..嘻嘻
主要原因是因为1.Taq酶以及引物在常温下易变性而导致失活
还是 2.在常温下，引物就会在tap的作用下发生反应，发生错配产生错误的PCR产物
还是3.在冰上做能保持扩增的特异性
感觉都有道理..但是和老师交流了一下,老师只是笑了笑,让我回来查资料..不解啊..
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1楼 2010-11-10 13:01:26
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xuewenling

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
还是尽量低温吧，操作其实只要速度快点就好，最后酶在冰上加不是为了保证当次试验质量，主要是考虑酶长期保存，另外你说的3点都有道理，但是一般操作不影响
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9楼2010-11-10 23:15:48
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hkfgwww

银虫 (正式写手)
PCR哪有这么复杂的，常温下没有问题的，除非高保真酶。
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微生物发酵
2楼2010-11-10 14:32:40
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-10 16:11:08
你列举的三点都是有道理的，但实际实验过程中只要在室温下操作就可以了，记得把所有东西加完后最后再把酶拿出来加上。如果你不是在做实验的时候速度奇慢，那上面的三点对实验结果基本没什么影响
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2010-11-10 14:54:48
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langduiyue

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-11-10 23:13:31
我觉的 那是相对于以前非热激活酶而言，pcr时温度能达到90多度，常温降解 有点扯，又不是长时间放在常温下。我们一直是常温做pcr 也没见有啥不妥。    到底是不是低温更好，也请高手指点
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角逐自我
4楼2010-11-10 16:11:11
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