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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR对照
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塞外雨

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】PCR对照 已有8人参与


PCR对照，发现以水为对照时扔能出现目的条带，更换水（新买的dd水）、更换引物（粉末重新稀释），扔是这样，请帮我分析，是不是酶污染，到现在只有没有试过换酶了，但是同样的水、同样的酶P另外一个片度不会出现这样的问题。
请大家帮我分析一下，能证明我的转化子成功连接了目的基因吗？是不是对照不合格呢？
谢谢大家。
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只想找到关心我、在我犹豫时能给我判断的人
1楼 2010-10-06 20:57:27
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houjinglhy

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我不明白你是怎么已水做对照的
是上样时直接加水吗？还是PCR无模板？还是PCR时什么也不加？
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
2楼2010-10-06 21:00:29
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塞外雨

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by houjinglhy at 2010-10-06 21:00:29:
我不明白你是怎么已水做对照的
是上样时直接加水吗？还是PCR无模板？还是PCR时什么也不加？

即不加模板，以水替代，其余和其他管一样，即也加引物也加酶。
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只想找到关心我、在我犹豫时能给我判断的人
3楼2010-10-06 21:01:59
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cato8163

银虫 (正式写手)
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小可认为：是点样时，隔壁孔飘过来了。
建议点样时，隔的远点，来排除。
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4楼2010-10-06 21:09:20
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

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amisking(金币+1):好像很久不见了啊！ 2010-10-06 22:12:24
呵呵，P另外的片段的时候也许那对引物的特异性要比这对引物特异性强。

建议：

(1) 可以换酶，看你是微生物专业的，不知道P的是不是16S之类的，这个比较容易出现类似情况，毕竟每种细菌都有。

(2)考虑换人来做
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
5楼2010-10-06 21:10:49
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houjinglhy

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amisking(金币+1):鼓励交流！ 2010-10-06 22:12:30
可能是哪步出现交叉污染了吧 但是从亮度来看的话 差别还是很大 如果是做克隆筛选应该可以判断是阳性转化子吧
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
6楼2010-10-06 21:11:30
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塞外雨

金虫 (著名写手)
谢谢以上各位的回答，今天换了管新酶再P一下。
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7楼2010-10-07 09:27:24
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foryever

木虫 (文坛精英)

假装忧伤的枯木桩
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我之前也遇到过这个问题。。。原因不明啊
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　　　　　　　　　♨物是人非事事休，欲语泪先流♨
8楼2010-10-07 10:22:42
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ljq2007

银虫 (小有名气)
也可以不另外加水扩一下，总体感觉是飘过去的
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9楼2010-10-07 10:43:21
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奋发-言午
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silicare(金币-1):纯表的不允许 2010-10-08 11:59:46
10楼2010-10-07 13:28:32
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