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nankou2008

铁杆木虫 (著名写手)

肥南瓜

[交流] 【求助/交流】PCR阴性对照总有扩增产物 都有哪些可能?

做荧光实时定量PCR  一个样品的NTC, 即无模板的阴性对照 总是有扩增曲线出来 请有经验的虫虫出来交流下 这种情况都有哪些可能?

PS: 刚开始以为是引物被污染了  或者操作过程 污染 ,后来重新定制引物  还是一样的结果 ,应该可以排除是污染的情况。
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湖深而静溪浅而鸣
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mafang68

金虫 (著名写手)

★ ★
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-13 05:39:39
nankou2008(金币+2):谢谢 2010-08-13 08:22:49
还是污染问题,你只排除了引物,但是MIX,水等是否污染未知。你可从五方面一一排除,人员,物料来源,操作环境,仪器设备以及操作方法。如果实验室仅你自己出现此情况,那么需从自身找原因,其他像做实验时需带手套等也需注意。呵呵,我知道的就这么多了
木虫啦,哈哈
2楼2010-08-12 21:41:40
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nankou2008

铁杆木虫 (著名写手)

肥南瓜

引用回帖:
Originally posted by mafang68 at 2010-08-12 21:41:40:
还是污染问题,你只排除了引物,但是MIX,水等是否污染未知。你可从五方面一一排除,人员,物料来源,操作环境,仪器设备以及操作方法。如果实验室仅你自己出现此情况,那么需从自身找原因,其他像做实验时需带手 ...

我只有一个样品出现这样的问题了,都是我一个人操作的,其它样品是好的,所以人员,操作环境,仪器,方法的问题应该不是,物料来源,除了模板引物,其它的成分用在别的样品也都是好的,是不是可以排除物料的原因?并且多次重复都是如此…… 唉很郁闷 这个样品好难伺候啊 不知引物自身在没有模板的情况下,还有什么可能能扩出东西来,百思不得其解啊……
谢谢!
湖深而静溪浅而鸣
3楼2010-08-13 08:28:11
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mafang68

金虫 (著名写手)

发个你做的引物扩增图,先看看
木虫啦,哈哈
4楼2010-08-13 23:05:42
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足下客

木虫 (正式写手)

★ ★
lstt09nk(金币+2):鼓励交流,欢迎常来~~ 2010-08-14 09:57:43
nankou2008(金币+2):现在就是怀疑引物的问题了,可是想不通的是,引物怎么样才会出现这样的结果呢? 呵呵 谢谢! 2010-08-15 09:48:26
做PCR用的Mix很可能被污染了,要么就是你用的水不行,我都是用双蒸水,要非常干净的才行,阴性对照几乎没有P出条带来过,再就是你用的枪头了,或者是引物设计的有问题。如过污染都可以排除的话,那就是引物有问题了
5楼2010-08-14 08:48:44
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黑妞儿

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 足下客 at 2010-08-14 08:48:44
做PCR用的Mix很可能被污染了,要么就是你用的水不行,我都是用双蒸水,要非常干净的才行,阴性对照几乎没有P出条带来过,再就是你用的枪头了,或者是引物设计的有问题。如过污染都可以排除的话,那就是引物有问题了

如果用的是试剂盒,阴性对照有扩增曲线是什么原因呢?
6楼2014-02-13 16:18:59
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by nankou2008 at 2010-08-13 08:28:11
我只有一个样品出现这样的问题了,都是我一个人操作的,其它样品是好的,所以人员,操作环境,仪器,方法的问题应该不是,物料来源,除了模板引物,其它的成分用在别的样品也都是好的,是不是可以排除物料的原因 ...

阳性样品的气溶胶污染阴性样品
7楼2014-02-14 11:02:16
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