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雪空凌

银虫 (初入文坛)

[求助] 为什么我的pcr阴性对照总有很浅的条带呢，各位大侠帮忙指点下

我最近做的pcr阴性对照总是出现很浅的条带，比加了模板的出现的条带弱，不知为何，试剂已经全部换过了，环境也换过了，求指点，感激不尽
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在最困难的时候就是最接近成功的时候，不可以放弃
1楼 2013-06-25 22:19:03
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
雪空凌(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-26 12:45:55
雪空凌: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-06-26 15:04:14
你是说阴性对照有模板链？那可能是阴性对照反应体系被模板链污染，可能是容器不干净，或者是微量移液器的吸杆和接头之间没有滤膜也没有消毒棉隔离，导致在PCR时的试剂气雾污染了微量移液器的吸杆（包括含模板的试剂），因此在阴性对照反应体系被模板链污染。
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2楼2013-06-25 22:37:51
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-26 12:46:03
水呢？是否 酶，dntp，buffer有污染？点样的时候是否有溢出
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3楼2013-06-26 00:09:15
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
雪空凌(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-26 12:46:11
你可以回收测序看看，可能是大肠的。有些批次的dna聚合酶在纯化时会有大肠的dna污染，换另一批次产品试试。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2013-06-26 08:13:08
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Catherinewh

金虫 (小有名气)
有没有可能是你的primer被模板contaminate了？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2013-06-27 21:08:12
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浮帅古

铜虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-07-13 13:23:54
配体系时先加阴性对照，后加模板，操作中小心气溶胶污染，祝楼主好运
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努力爱！
6楼2013-07-13 00:46:58
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oliver501

新虫 (初入文坛)
可能是引物形成了二聚体或多聚体
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7楼2013-07-23 22:37:03
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