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zishilanxuan

金虫 (小有名气)


[交流] 请问各位大侠,我的这个PCR到底是什么原因,请大家给我分析一下呗?

请问各位大侠,我的这个PCR到底是什么原因,请大家给我分析一下呗?第一个是2000的Mark,后面的六个是不同温度的,我的目的基因是1911,请问各位大侠,我的这个PCR能用么?哪个带应该是呢?补充一点,我用的是高保真的酶!
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太极拳

木虫 (小有名气)



zishilanxuan(金币+1): 谢谢参与
不同的温度跑出几乎一样的带型,个人认为引物设计的不好,而且目的条带很不明显,还没有下面的杂带亮,建议重新设计引物!
2楼2012-06-21 14:27:52
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dshlove

木虫 (正式写手)



zishilanxuan(金币+1): 谢谢参与
第四个上面的条带应该就是了,可是,看你这胶感觉这也太惨了,不知道你的温度梯度是多少的?
3楼2012-06-21 15:26:31
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zkyysmzl

新虫 (正式写手)



zishilanxuan(金币+1): 谢谢参与
这个,则么分析啊。咋我什么都没看出来啊。
4楼2012-06-21 18:42:23
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Constig

银虫 (小有名气)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-06-21 19:41:33
杂带太多了,不知道温度梯度有没有在60以上的,我们实验室一般先用60跑一次,因为特异性比较高,一般条带就比较单一,如果没有条带再跑一次梯度。看你的胶图,在1900bp左右没有明显条带,如果温度没有问题,肯定是引物特异性不高,或者简并引物过多。希望有所帮助
5楼2012-06-21 19:23:42
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504775490

金虫 (知名作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主的杂带很多,第四个样最亮的那条带可能是你的目的条带,建议重新设计引物再做一次,这个引物的特异性不高!个人意见,仅供参考!
6楼2012-06-21 23:16:40
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taigongzaici

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看实验目的主要是,要是回收的话,直接切胶纯化就可以了,高保真酶扩增效率就是不如rTaq,为了提高特异性,可适当提高退火温度试试看
7楼2012-06-22 09:41:39
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jlc0225

至尊木虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
把目的带切胶回收后作为PCR的模板重新做一次PCR
8楼2012-06-22 11:44:05
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biochemislxr

银虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
PCR结果出来怎么会这么杂?你的模板是什么啊?cDNA?如果是cDNA,楼主设计的引物会不会是与基因中的重复序列匹配的
9楼2012-06-27 16:53:52
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lyweichen

铁虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
据我目测,没有1911的条带
10楼2012-06-27 19:45:18
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jqq1985

银虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
送鲜花一朵
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助,很热心哦 2012-06-28 15:53:31
楼主用的是DL2000的marker(2000,1000,750,500,200,100?)吧?个人以为marker旁边第一道从上往下第二条应该就是目标条带了,不知道你上样多少PCR产物。觉得这个浓度还挺高的。就是杂带非常多,应该引物设计的不好。但是可以割胶回收的。如果执着于P的单一一些,这个引物似乎不太好。可以试着在第一道的退火温度基础上2度2度往上加,非特异性条带应该会少点,但是你的目标产物可能也会越来越少,最终是什么样子的结果不太清楚。
11楼2012-06-28 13:30:51
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