24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2578  |  回复: 20

weining1203

新虫 (小有名气)

[求助] rt-pcr图,请大神们帮助分析一下,急。。。谢谢。。。

大神们请帮忙分析一下RT-PCR电泳图,第一次做不明白什么原因。。。第一张是rna图,后两张是曝光度不同的pcr图。目的条带应该为850bp左右,引物为简并引物,图上最大的条带好像只有500bp,最小100bp,marker为DL2000,请好心虫友帮助分析一下,哪里出了问题,应该怎样设置pcr程序,引物和pcr条件都是文献上的。。。急。。。pcr程序:
1 94℃       4min

2 94℃       1min
3 49度     1min
4 72度     1min
32个循环
5 72度     10min
6 4度

rna






问题补充:rt-pcr试剂盒为宝生物 RNA PCR  KIT(AMV) Ver.3.0, 酶为takala EX Taq HS   兼并引物长度20bp

[ Last edited by weining1203 on 2012-4-18 at 11:25 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cheng_xiao

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-19 13:50:37
从图上看出1、你的胶做的不好或者电泳条件不好,你的电泳条带歪了
               2、你的退火温度应根据你的引物单子自己设置,不应该抄文献上的
               3、目标片段不明确,说明你的引物设计不好,你应该比对一下,确定你的引物扩增片段准确
我努力我奋斗我成功
2楼2012-04-18 20:14:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weining1203

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cheng_xiao at 2012-04-18 20:14:59:
从图上看出1、你的胶做的不好或者电泳条件不好,你的电泳条带歪了
               2、你的退火温度应根据你的引物单子自己设置,不应该抄文献上的
               3、目标片段不明确,说明你的引物设计不好,你 ...

谢谢您的回复 胶做的确实不好,第一次把marker跑成这样。。。 这个引物是通用引物,我想应该没问题吧。。。 下次想提高退火温度试一下。。。
3楼2012-04-18 21:48:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励应助 2012-04-19 13:50:57
RNA挺好的,看PCR图,完全没有800多的带,下面有非特异性条带,你要考虑下引物的特异性,如果引物没问题那就摸摸退火温度吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
我就是我
4楼2012-04-19 00:01:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

超然渡陈

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
大量弥散条带情况出现建议你做一下梯度PCR,找一下最佳退火温度,然后根据你的酶活性(酶的说明书上有)和你片段大小在设定最佳延伸时间。
6楼2012-04-19 16:23:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hackett

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
摸条件吧,PCR这东西要是一次能做出来就真是运气好。
一旦做出来了重复性很好,就比较可靠了。
Dreamer
8楼2012-04-19 22:22:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

weining1203

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wtyyyyy1988 at 2012-04-19 00:01:16:
RNA挺好的,看PCR图,完全没有800多的带,下面有非特异性条带,你要考虑下引物的特异性,如果引物没问题那就摸摸退火温度吧

谢谢
5楼2012-04-19 11:02:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weining1203

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 超然渡陈 at 2012-04-19 16:23:00:
大量弥散条带情况出现建议你做一下梯度PCR,找一下最佳退火温度,然后根据你的酶活性(酶的说明书上有)和你片段大小在设定最佳延伸时间。

谢谢 准备摸索一下退火温度。。。酶活性延伸温度为72°,说明书上说的
7楼2012-04-19 19:14:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weining1203

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by hackett at 2012-04-19 22:22:34:
摸条件吧,PCR这东西要是一次能做出来就真是运气好。
一旦做出来了重复性很好,就比较可靠了。

是啊  呵呵  谢谢回复
9楼2012-04-20 08:58:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

斯多格格

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们实验室都是预变性5min,变性30s,退火30s,延伸时间与自己的产物长度有关,一直都挺好的,你可以试试。还有就是建议你设一个内参基因看一下反转录是否正常,最好pcr时加蒸馏水对照。
书自香我何须花
10楼2012-04-21 09:54:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 weining1203 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070300化学279求调剂 +16 哈哈哈^_^ 2026-03-31 19/950 2026-04-06 14:14 by 无际的草原
[考研] 生物学求调剂 +5 15064154688 2026-04-03 5/250 2026-04-06 11:56 by lijunpoly
[考研] 考研调剂 +5 美丽的youth_ 2026-04-04 6/300 2026-04-06 06:57 by houyaoxu
[考研] 复试调剂 +13 呼呼?~+123456 2026-04-05 13/650 2026-04-05 22:07 by 醉翁wl
[考研] 工科277分求调剂材料 +8 上了上了上哦 2026-04-05 9/450 2026-04-05 13:05 by wwytracy
[有机交流] 甲醇/二氯 1:15过柱子 5+3 a哎y呦w喂 2026-03-31 3/150 2026-04-05 10:42 by 88817753
[考研] 生物工程求调剂 +6 喜欢还是不甘心 2026-04-05 6/300 2026-04-05 10:28 by 唐沐儿
[考研] 材料调剂 +18 一样YWY 2026-04-02 19/950 2026-04-04 22:14 by hemengdong
[考研] 环境285分,过六级,求调剂 +10 xhr12 2026-04-02 10/500 2026-04-04 21:53 by bn53987
[考研] 309求调剂 +4 快乐的小白鸽 2026-04-04 5/250 2026-04-04 15:55 by cql1109
[考研] 0710生物学336分求调剂 +6 kiyy 2026-04-01 8/400 2026-04-04 10:10 by kiyy
[考研] 求生物学专业调剂-332分 +5 云朵遛弯指南 2026-04-04 5/250 2026-04-04 10:05 by rzh123456
[考研] 317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂 +6 YinTai 2026-04-03 6/300 2026-04-03 22:30 by 无际的草原
[考研] 285求调剂 +5 AZMK 2026-04-03 8/400 2026-04-03 18:17 by AZMK
[考研] 271求调剂 +15 勒布朗@ 2026-03-31 20/1000 2026-04-02 11:24 by Sammy2
[考研] 材料调剂 +12 一样YWY 2026-04-01 12/600 2026-04-02 00:21 by 百秒光年
[考研] 279求调剂 +7 莫xiao 2026-04-01 7/350 2026-04-01 22:05 by 客尔美德
[考研] 284求调剂 +12 小熊~~ 2026-03-31 12/600 2026-04-01 20:23 by 花??
[考研] 土木304求调剂 +5 顶级擦擦 2026-03-31 5/250 2026-04-01 08:15 by fdcxdystjk¥
[考研] 323分 食品与营养调剂 +3 嘿ooo 2026-03-31 3/150 2026-03-31 09:38 by longlotian
信息提示
请填处理意见