查看: 3064  |  回复: 20
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

weining1203

新虫 (小有名气)

[求助] rt-pcr图,请大神们帮助分析一下,急。。。谢谢。。。

大神们请帮忙分析一下RT-PCR电泳图,第一次做不明白什么原因。。。第一张是rna图,后两张是曝光度不同的pcr图。目的条带应该为850bp左右,引物为简并引物,图上最大的条带好像只有500bp,最小100bp,marker为DL2000,请好心虫友帮助分析一下,哪里出了问题,应该怎样设置pcr程序,引物和pcr条件都是文献上的。。。急。。。pcr程序:
1 94℃       4min

2 94℃       1min
3 49度     1min
4 72度     1min
32个循环
5 72度     10min
6 4度

rna






问题补充:rt-pcr试剂盒为宝生物 RNA PCR  KIT(AMV) Ver.3.0, 酶为takala EX Taq HS   兼并引物长度20bp

[ Last edited by weining1203 on 2012-4-18 at 11:25 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weining1203

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by hackett at 2012-04-19 22:22:34:
摸条件吧,PCR这东西要是一次能做出来就真是运气好。
一旦做出来了重复性很好,就比较可靠了。

是啊  呵呵  谢谢回复
9楼2012-04-20 08:58:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答

cheng_xiao

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-19 13:50:37
从图上看出1、你的胶做的不好或者电泳条件不好,你的电泳条带歪了
               2、你的退火温度应根据你的引物单子自己设置,不应该抄文献上的
               3、目标片段不明确,说明你的引物设计不好,你应该比对一下,确定你的引物扩增片段准确
我努力我奋斗我成功
2楼2012-04-18 20:14:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weining1203

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cheng_xiao at 2012-04-18 20:14:59:
从图上看出1、你的胶做的不好或者电泳条件不好,你的电泳条带歪了
               2、你的退火温度应根据你的引物单子自己设置,不应该抄文献上的
               3、目标片段不明确,说明你的引物设计不好,你 ...

谢谢您的回复 胶做的确实不好,第一次把marker跑成这样。。。 这个引物是通用引物,我想应该没问题吧。。。 下次想提高退火温度试一下。。。
3楼2012-04-18 21:48:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励应助 2012-04-19 13:50:57
RNA挺好的,看PCR图,完全没有800多的带,下面有非特异性条带,你要考虑下引物的特异性,如果引物没问题那就摸摸退火温度吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
我就是我
4楼2012-04-19 00:01:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] 用NBS溴化时溶剂除了CCl4外还有什么 +3 18834002860 2026-10-12 6/300 2026-10-15 14:30 by 长沙摩尔信息科�
[硕博家园] 极限拉扯,如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了,离AI做有机合成还有多远? +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么? +4 好运来~9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷!
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬,路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些? +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
请填处理意见