应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 液相新手请大家分析一下这个样品图~谢谢了！
111/2返回列表12下一页
查看: 1714  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

[求助] 液相新手请大家分析一下这个样品图~谢谢了！

本人是一名液相新手，最近才开始学习使用HPLC，之前实验室都是用液相简单的跑一下乙醇，糖类，而我这次需要测的东西是NADH，中文全名为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，即常说的还原型辅酶Ⅰ，查阅了许多文献，根据其中的一篇文献资料进行重复试验.
该文献的色谱分析条件为：
柱条件：Agilent1200series，columnstable-C18（250minx4．6mm)柱。
梯度洗脱条件：0min100％bufferA；10min50％bufferA；11min100％bufferA；15min100％bufferA。
流速1．0mL／min，
检测波长：254nm，340nm。
柱温：35℃。
bufferAH7.0 PBS(磷酸钾缓冲液）

本人所用柱子为inertsil OS-SP(C18）（150minx4．6mm）柱
用标准样品跑了一张如图，大约9min的时候出峰……如图所示
之后提取了酵母胞内的NADH跑了几次，出现的峰非常诡异，从9min开始，基线都开始不稳了……求各位老师分析下，需要改进什么，新手虚心请教！谢谢！

图见附件！！
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : NADH标准.bmp
    • 2011-11-27 17:19:11, 949.55 K
  • 附件 2 : 跑出来的图.bmp
    • 2011-11-27 17:19:20, 951.05 K

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
1楼 2011-11-27 17:19:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

foxling2

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

在样品中加点标准，看看结果，如果加标样出峰，就可以说明问题了
赞一下 回复此楼
yyh
2楼2011-11-28 11:03:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

foxling2

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

还有，你的样品图谱纵坐标应该放大到和标准一样，这样比较才能看出细节的东西
赞一下 回复此楼
yyh
3楼2011-11-28 11:04:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer
引用回帖:
2楼: Originally posted by foxling2 at 2011-11-28 11:03:32:
在样品中加点标准，看看结果，如果加标样出峰，就可以说明问题了

如果添加标准跑出了峰是不是说明我样品里面NADH含量过低，或者说根本没有提取出来呢？
我在想，是不是由于文献里面的柱子长度是250，而我的是150的原因？改变一下梯度时间是不是有用呢？
赞一下 回复此楼
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
4楼2011-11-28 16:10:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer
引用回帖:
3楼: Originally posted by foxling2 at 2011-11-28 11:04:58:
还有，你的样品图谱纵坐标应该放大到和标准一样，这样比较才能看出细节的东西

补两张放大一点的图……
赞一下 回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : 放大.bmp
    • 2011-11-28 16:26:02, 942.05 K
  • 附件 2 : 放大B.bmp
    • 2011-11-28 16:26:20, 985.55 K
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
5楼2011-11-28 16:26:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

foxling2

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by Marado at 2011-11-28 16:10:35:
如果添加标准跑出了峰是不是说明我样品里面NADH含量过低，或者说根本没有提取出来呢？
我在想，是不是由于文献里面的柱子长度是250，而我的是150的原因？改变一下梯度时间是不是有用呢？

如果加标样出峰，且回收率大于90%，说明你的提取方法基本没问题。问题还在于你样品中可能含量就很低
赞一下 回复此楼
yyh
6楼2011-11-29 13:06:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

foxling2

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

Marado(金币+2): 多谢指点，确实是样品含量比较低，加了一点点标准液，立马峰形好多了. 2011-12-01 09:31:00
引用回帖:
5楼: Originally posted by Marado at 2011-11-28 16:26:23:
补两张放大一点的图……

从这两张放大图来看：

1 样品很脏，需要前处理。因为你的基线在标准中抬高不明显，而样品抬高明显，如果你的样品含量低，这么高的基线都给淹没了。

2 分离度不够。在标准样出峰处一堆子杂峰，需要改进梯度。

3 如果是相同进样体积下，那么样品中含量比标准低几倍的浓度，需要富集。
赞一下 回复此楼
yyh
7楼2011-11-29 13:11:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kaven186

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by Marado at 2011-11-28 16:10:35:
如果添加标准跑出了峰是不是说明我样品里面NADH含量过低，或者说根本没有提取出来呢？
我在想，是不是由于文献里面的柱子长度是250，而我的是150的原因？改变一下梯度时间是不是有用呢？

你可以换一根250的柱子，250的柱效快是150的两倍了  可能更加有利于分离
赞一下 回复此楼
广州
8楼2011-11-29 13:33:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaohaiyu

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你做糖是什么糖呢？我也是刚开始做糖，效果也不好呢
赞一下 回复此楼
9楼2011-11-29 16:49:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer
引用回帖:
9楼: Originally posted by xiaohaiyu at 2011-11-29 16:49:12:
你做糖是什么糖呢？我也是刚开始做糖，效果也不好呢

我不是跑糖……是跑辅酶
赞一下 回复此楼
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
10楼2011-12-01 09:28:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Marado 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭