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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 液相新手请大家分析一下这个样品图~谢谢了！
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

[求助] 液相新手请大家分析一下这个样品图~谢谢了！

本人是一名液相新手，最近才开始学习使用HPLC，之前实验室都是用液相简单的跑一下乙醇，糖类，而我这次需要测的东西是NADH，中文全名为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，即常说的还原型辅酶Ⅰ，查阅了许多文献，根据其中的一篇文献资料进行重复试验.
该文献的色谱分析条件为：
柱条件：Agilent1200series，columnstable-C18（250minx4．6mm)柱。
梯度洗脱条件：0min100％bufferA；10min50％bufferA；11min100％bufferA；15min100％bufferA。
流速1．0mL／min，
检测波长：254nm，340nm。
柱温：35℃。
bufferAH7.0 PBS(磷酸钾缓冲液）

本人所用柱子为inertsil OS-SP(C18）（150minx4．6mm）柱
用标准样品跑了一张如图，大约9min的时候出峰……如图所示
之后提取了酵母胞内的NADH跑了几次，出现的峰非常诡异，从9min开始，基线都开始不稳了……求各位老师分析下，需要改进什么，新手虚心请教！谢谢！

图见附件！！
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  • 附件 1 : NADH标准.bmp
    • 2011-11-27 17:19:11, 949.55 K
  • 附件 2 : 跑出来的图.bmp
    • 2011-11-27 17:19:20, 951.05 K

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1楼 2011-11-27 17:19:24
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer
引用回帖:
2楼: Originally posted by foxling2 at 2011-11-28 11:03:32:
在样品中加点标准，看看结果，如果加标样出峰，就可以说明问题了

如果添加标准跑出了峰是不是说明我样品里面NADH含量过低，或者说根本没有提取出来呢？
我在想，是不是由于文献里面的柱子长度是250，而我的是150的原因？改变一下梯度时间是不是有用呢？
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4楼2011-11-28 16:10:35
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foxling2

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

在样品中加点标准，看看结果，如果加标样出峰，就可以说明问题了
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yyh
2楼2011-11-28 11:03:32
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foxling2

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

还有，你的样品图谱纵坐标应该放大到和标准一样，这样比较才能看出细节的东西
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yyh
3楼2011-11-28 11:04:58
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer
引用回帖:
3楼: Originally posted by foxling2 at 2011-11-28 11:04:58:
还有，你的样品图谱纵坐标应该放大到和标准一样，这样比较才能看出细节的东西

补两张放大一点的图……
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  • 附件 1 : 放大.bmp
    • 2011-11-28 16:26:02, 942.05 K
  • 附件 2 : 放大B.bmp
    • 2011-11-28 16:26:20, 985.55 K
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5楼2011-11-28 16:26:23
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