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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

[求助] 液相新手请大家分析一下这个样品图~谢谢了!

本人是一名液相新手,最近才开始学习使用HPLC,之前实验室都是用液相简单的跑一下乙醇,糖类,而我这次需要测的东西是NADH,中文全名为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸,即常说的还原型辅酶Ⅰ,查阅了许多文献,根据其中的一篇文献资料进行重复试验.
该文献的色谱分析条件为:
柱条件:Agilent1200series,columnstable-C18(250minx4.6mm)柱。
梯度洗脱条件:0min100%bufferA;10min50%bufferA;11min100%bufferA;15min100%bufferA。
流速1.0mL/min,
检测波长:254nm,340nm。
柱温:35℃。
bufferAH7.0 PBS(磷酸钾缓冲液)

本人所用柱子为inertsil OS-SP(C18)(150minx4.6mm)柱
用标准样品跑了一张如图,大约9min的时候出峰……如图所示
之后提取了酵母胞内的NADH跑了几次,出现的峰非常诡异,从9min开始,基线都开始不稳了……求各位老师分析下,需要改进什么,新手虚心请教!谢谢!

图见附件!!
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  • 附件 1 : NADH标准.bmp
  • 2011-11-27 17:19:11, 949.55 K
  • 附件 2 : 跑出来的图.bmp
  • 2011-11-27 17:19:20, 951.05 K

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foxling2

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by Marado at 2011-11-28 16:10:35:
如果添加标准跑出了峰是不是说明我样品里面NADH含量过低,或者说根本没有提取出来呢?
我在想,是不是由于文献里面的柱子长度是250,而我的是150的原因?改变一下梯度时间是不是有用呢?

如果加标样出峰,且回收率大于90%,说明你的提取方法基本没问题。问题还在于你样品中可能含量就很低
yyh
6楼2011-11-29 13:06:37
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foxling2

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

在样品中加点标准,看看结果,如果加标样出峰,就可以说明问题了
yyh
2楼2011-11-28 11:03:32
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foxling2

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

还有,你的样品图谱纵坐标应该放大到和标准一样,这样比较才能看出细节的东西
yyh
3楼2011-11-28 11:04:58
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

引用回帖:
2楼: Originally posted by foxling2 at 2011-11-28 11:03:32:
在样品中加点标准,看看结果,如果加标样出峰,就可以说明问题了

如果添加标准跑出了峰是不是说明我样品里面NADH含量过低,或者说根本没有提取出来呢?
我在想,是不是由于文献里面的柱子长度是250,而我的是150的原因?改变一下梯度时间是不是有用呢?
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
4楼2011-11-28 16:10:35
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