10楼: Originally posted by 斯多格格 at 2012-04-21 09:54:22:
我们实验室都是预变性5min，变性30s，退火30s，延伸时间与自己的产物长度有关，一直都挺好的，你可以试试。还有就是建议你设一个内参基因看一下反转录是否正常，最好pcr时加蒸馏水对照。

13楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-04-25 11:27:34:
看了楼主的设定参数，这么小的条带，用不着这么长的时间。给个参考设定：1 94℃       2 min
2 94℃     30s
3 退火温度    30s
4 72度     1min
35个循环
5 72度     10min
6 4度

退火温度的话，可以看 ...

13楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-04-25 11:27:34:
看了楼主的设定参数，这么小的条带，用不着这么长的时间。给个参考设定：1 94℃       2 min
2 94℃     30s
3 退火温度    30s
4 72度     1min
35个循环
5 72度     10min
6 4度

退火温度的话，可以看 ...

15楼: Originally posted by weining1203 at 2012-04-25 14:42:31:
合成单上的Tm值很低，才44度。。。 我都不敢往下降了。。。看文献上该引物退货温度一般是49度左右。。。还有一个是65度。。。

16楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-04-25 19:45:11:
呵呵，44℃是有点低！！ 那你就试试44℃。你说的一个是49度，一个是65度是什么意思？是一个基因前后引物的两个退火温度，还是两个不同基因的引物的退火温度?

17楼: Originally posted by weining1203 at 2012-04-25 22:34:14:
同一个引物 两片文章上用的不同的退火温度。。。一个用49 一个用65

18楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-04-26 09:30:56:
我赛，相同的引物不同的文章里面出现的退火温度竟然相差这么大！！！  文献是中文还是英文？  这个得好好研究研究，难道说两个温度都可以批出条带来？  建议楼主还是自己试一试，不妨做个温度梯度，探究一下引物 ...