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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问各位大侠，我的这个PCR到底是什么原因，请大家给我分析一下呗？
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zishilanxuan

金虫 (小有名气)

[交流] 请问各位大侠，我的这个PCR到底是什么原因，请大家给我分析一下呗？

请问各位大侠，我的这个PCR到底是什么原因，请大家给我分析一下呗？第一个是2000的Mark,后面的六个是不同温度的，我的目的基因是1911，请问各位大侠，我的这个PCR能用么？哪个带应该是呢？补充一点，我用的是高保真的酶！
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jqq1985

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1楼2012-06-21 13:46:36
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太极拳

木虫 (小有名气)
★
zishilanxuan(金币+1): 谢谢参与
不同的温度跑出几乎一样的带型，个人认为引物设计的不好，而且目的条带很不明显，还没有下面的杂带亮，建议重新设计引物！
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2楼2012-06-21 14:27:52
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dshlove

木虫 (正式写手)
★
zishilanxuan(金币+1): 谢谢参与
第四个上面的条带应该就是了，可是，看你这胶感觉这也太惨了，不知道你的温度梯度是多少的？
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3楼2012-06-21 15:26:31
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zkyysmzl

新虫 (正式写手)
★
zishilanxuan(金币+1): 谢谢参与
这个，则么分析啊。咋我什么都没看出来啊。
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4楼2012-06-21 18:42:23
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Constig

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-06-21 19:41:33
杂带太多了，不知道温度梯度有没有在60以上的，我们实验室一般先用60跑一次，因为特异性比较高，一般条带就比较单一，如果没有条带再跑一次梯度。看你的胶图，在1900bp左右没有明显条带，如果温度没有问题，肯定是引物特异性不高，或者简并引物过多。希望有所帮助
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5楼2012-06-21 19:23:42
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504775490

金虫 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主的杂带很多，第四个样最亮的那条带可能是你的目的条带，建议重新设计引物再做一次，这个引物的特异性不高！个人意见，仅供参考！
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6楼2012-06-21 23:16:40
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taigongzaici

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看实验目的主要是，要是回收的话，直接切胶纯化就可以了，高保真酶扩增效率就是不如rTaq,为了提高特异性，可适当提高退火温度试试看
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7楼2012-06-22 09:41:39
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jlc0225

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
把目的带切胶回收后作为PCR的模板重新做一次PCR
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8楼2012-06-22 11:44:05
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biochemislxr

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
PCR结果出来怎么会这么杂？你的模板是什么啊？cDNA？如果是cDNA，楼主设计的引物会不会是与基因中的重复序列匹配的
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9楼2012-06-27 16:53:52
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lyweichen

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
据我目测，没有1911的条带
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10楼2012-06-27 19:45:18
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jqq1985

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助，很热心哦 2012-06-28 15:53:31
楼主用的是DL2000的marker（2000,1000,750，500,200,100？）吧？个人以为marker旁边第一道从上往下第二条应该就是目标条带了，不知道你上样多少PCR产物。觉得这个浓度还挺高的。就是杂带非常多，应该引物设计的不好。但是可以割胶回收的。如果执着于P的单一一些，这个引物似乎不太好。可以试着在第一道的退火温度基础上2度2度往上加，非特异性条带应该会少点，但是你的目标产物可能也会越来越少，最终是什么样子的结果不太清楚。
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11楼2012-06-28 13:30:51
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