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wangchunling

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[交流] 【求助/交流】PCR阴性对照总有微弱条带！！！已有16人参与

最近做的PCR的阴性对照总是出现条带，水、试剂、引物都换过了，但仍旧不能消除！急呀！到底怎么回事呀？HELP！

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1楼 2010-12-29 17:53:03

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fjt198719

木虫 (著名写手)

永远的菜鸟

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正常，PCR说明不了问题，如果是质粒的话最好是酶切验证

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独YY不如众YY！！！

2楼2010-12-29 17:57:50

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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖甜到憂傷

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微弱条带还好，反正阳性的条带很亮就可以了，影响不大。如果出现阴性贼亮贼亮那就麻烦了。

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Thank-you，so-blue.

3楼2010-12-29 18:08:29

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xiaoqi708

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amisking(金币+2):鼓励交流！ 2010-12-29 20:15:28

酶和PCR Buffer 是不是也被污染了。
如果这些都没有问题的话，那可能是楼主在操作的时候，有一个习惯性动作老是改变不了所导致的。
建议你做实验时阳性对照和阴性对照离的远一点，最好阴性对照放在最上游的位置，并且最先加入，然后盖上盖子。再依次加入模板和阳性对照。

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4楼2010-12-29 19:52:40

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xuexue1204

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你的条带是不是引物二聚体呀？阴性对照都有引物二聚体的

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共同学习，共同进步，共同提高，加油！

5楼2010-12-29 20:14:00

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wangchunling

金虫 (小有名气)

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引用回帖:

Originally posted by xuexue1204 at 2010-12-29 20:14:00:
你的条带是不是引物二聚体呀？阴性对照都有引物二聚体的

很显然，不是引物二聚体，阴性对照产物和实验组大小一样……

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6楼2010-12-30 09:07:31

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wangchunling

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Originally posted by xiaoqi708 at 2010-12-29 19:52:40:
酶和PCR Buffer 是不是也被污染了。
如果这些都没有问题的话，那可能是楼主在操作的时候，有一个习惯性动作老是改变不了所导致的。
建议你做实验时阳性对照和阴性对照离的远一点，最好阴性对照放在最上游的位置 ...

酶和buffer也换过了，我也是先加阴性对照的，就像你说的那样，但仍旧有带

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7楼2010-12-30 09:09:19

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yixuanwin

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西瓜(金币+2): 嗯~~有可能哈~ 2011-05-04 22:08:32

跑胶点样溢过去的吧。

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8楼2010-12-30 09:15:32

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世外清风

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引用回帖:

Originally posted by yixuanwin at 2010-12-30 09:15:32:
跑胶点样溢过去的吧。

同意他的看法，很有可能，如一样大小的话，下次少点一点样试试

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9楼2010-12-30 09:23:42

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世外清风

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西瓜(金币+2): 经验，经验~ 2011-05-04 22:08:46

引用回帖:

Originally posted by wangchunling at 2010-12-30 09:07:31:

很显然，不是引物二聚体，阴性对照产物和实验组大小一样……

也可隔几个孔再点阴性对照，再做个空白对照试试呵，多做些对照找找原因，哈哈

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10楼2010-12-30 09:30:36

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