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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】求PCR条带微弱的原因和解决方法
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321wangke321

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】求PCR条带微弱的原因和解决方法 已有9人参与

1、大家帮忙分析下原因，为什么这么淡?
2、看看怎样让条带更加亮些？25微升体系：17微升超纯水，2.5微升buffer，2微升dNTP，1微升上游引物，1微升下游引物，0.5微升Taq酶。引物浓度是10毫摩尔每微升。
3、能不能把条带切下来再P一次？



[ Last edited by 321wangke321 on 2011-3-25 at 19:08 ]
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王者风范，一切皆有可能。
1楼 2011-03-24 22:33:21
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
图呢 ？
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2楼2011-03-25 08:48:14
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hitliutao

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
试着加些BSA,要是还不行,就是模板本身的问题了.
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3楼2011-03-25 10:15:01
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rioarsenal

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
模板是什么，质量如何啊？
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4楼2011-03-25 10:29:34
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yabxxh

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你这个问题问的，没有图片就不说了，连片段的信息，以及如何得到的，还有具体的细节都没有，想帮你也帮不上了
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5楼2011-03-25 11:38:55
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+2): 鼓励回答 2011-03-25 23:01:02
条带淡的原因不好说，可以试试把条带切下来再P。不过这种同一对引物再扩增产物的情况，很可能P不出来哦。如果你是拿来克隆的，不建议这样做。因为Taq酶保真性差，一次PCR就可能有错误，你拿PCR产物来再P，出错的概率就很高了。
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6楼2011-03-25 12:16:13
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321wangke321

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 阿修罗Axuro at 2011-03-25 08:48:14:
图呢 ？

忘记了，已经上传了，麻烦给看看
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王者风范，一切皆有可能。
7楼2011-03-25 19:08:41
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321wangke321

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yabxxh at 2011-03-25 11:38:55:
你这个问题问的，没有图片就不说了，连片段的信息，以及如何得到的，还有具体的细节都没有，想帮你也帮不上了

已经上传了，麻烦给看看
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王者风范，一切皆有可能。
8楼2011-03-25 19:09:07
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321wangke321

金虫 (正式写手)
谢谢大家的帮助
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王者风范，一切皆有可能。
9楼2011-03-25 19:10:08
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+4): 鼓励交流 2011-03-25 23:01:16
引用回帖:
Originally posted by 321wangke321 at 2011-03-25 19:08:41:
忘记了，已经上传了，麻烦给看看

是蛮弱的，不知道楼主是用的什么模板，是质粒还是基因组DNA，不过我估计应该是基因组，质粒一般不会那么弱。可以试着考虑用扩增效率高的酶看，你是用的哪款酶？或者建议楼主模板和引物都加倍，酶的量可以少点，0.3或者0。2就够了，酶浓度高了的话甘油会影响活性的。一次P俩管，循环数可以适当的加5个。再试一试，如果还不好，就是可能引物太长了？模板质量不好？退火温度不适合？都有可能了。
不过楼主的带还是P出来了，应该没问题的，循环数适当放大。如果用的高保真酶的话，可以切下来做模板再P。
还有就是楼主的MARKER也不是很亮~是加少了还是曝光度不够？

[ Last edited by 阿修罗Axuro on 2011-3-25 at 22:32 ]
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10楼2011-03-25 22:29:51
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