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zjwang

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】pull down实验阴性对照也有带?

最近作pull down 实验,用gst和mbp标签,用空的gst对照也能杂出mbp条带,怎么回事呢,做过的大侠指点阿,谢谢。
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zjwang

木虫 (正式写手)

做过的出出主意阿!
2楼2010-08-25 16:39:32
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wdongdong

金虫 (小有名气)


zjwang(金币+1): 2010-08-26 17:08:28
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-08-26 18:18:19
washing buffer 多洗几次,可以加大去污剂的量
3楼2010-08-26 16:08:50
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jacky1985310

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-07-05 13:38:41
我也遇到同样的问题。
现在我反过来做用Amylose去immobilize MBP然后去拉GST。小量试验成功过一次。一大量反应后又出现之前的问题了。
目前的感觉就是反应的sample浓度不是越高越好,会造成洗脱困难。
由于我用的是batch法,如果resin的含量过高的话,靠离心还是很难洗干净的。
不知道仁兄的问题解决了没有呢?多多分享下经验
失败也是宝贵的经验,分享下避免大家犯同样的错误。
4楼2012-07-05 11:08:49
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jacky1985310

新虫 (小有名气)

引用回帖:
1916438楼: Originally posted by wdongdong at 2010-08-26 16:08:50
washing buffer 多洗几次,可以加大去污剂的量

你好,请问去污剂哪些比较好呢,麻烦能推荐下并给出相应的使用浓度吗?谢谢
5楼2012-07-05 11:09:59
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浩子jerry

金虫 (正式写手)

(ˇˍˇ) 想~


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
各位仁兄,有没有解决的办法啊,我做的是验证药物和蛋白的结合,western结果阴性对照里的蛋白表达较多,比较棘手啊,求助啊!
嘎嘎
6楼2014-03-17 10:11:07
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