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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 免疫共沉淀和GST pull down技术各有何优势
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yicao917

木虫 (小有名气)

[求助] 免疫共沉淀和GST pull down技术各有何优势

本人第一次涉足蛋白组学的研究，请教各位大侠免疫共沉淀和GST pull down技术各有何优势？
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1楼 2011-05-08 13:17:53
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-08 16:32:50
dhd997(金币+20): 应楼主要求，追加20金币。 2011-05-16 08:59:30
小木虫: 金币+2, 帖子真精彩 2014-06-14 08:53:23
免疫共沉淀实验由于在非变性实验条件性进行，这样蛋白质之间的天然相互作用得以最大程度的保留，因此可以比较真实的反应蛋白质之间的相互作用。但也基于此点，免疫共沉淀并不能显示蛋白质之间的相互作用是直接还是间接的，因为通过目的蛋白抗体共沉淀下来的是一个蛋白复合物，而不仅仅是和目的蛋白直接相互作用的蛋白。而GST-Pull down实验可以通过体外实验条件，去除其它蛋白的影响，从而确定目的蛋白和待检测蛋白是否可以发生直接相互作用。GST亲和层析和GST Pull-down方法的基本原理是：利用重组技术将探针蛋白与GST（Glutathione S transferase）融合，融合蛋
白通过GST与固相化在载体上的GTH（Glutathione）
亲和结合。因此，当与融合蛋白有相互作用的蛋白
通过层析柱时或与此固相复合物混合时就可被吸
附而分离。
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2楼2011-05-08 14:08:42
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yicao917

木虫 (小有名气)
dhd997: 因为他没有选择确定回帖应助，你想要加几分，版主可以从你那里扣除，然后加给他。 2011-05-12 18:59:44
引用回帖:
Originally posted by cdl007 at 2011-05-08 14:08:42:
免疫共沉淀实验由于在非变性实验条件性进行，这样蛋白质之间的天然相互作用得以最大程度的保留，因此可以比较真实的反应蛋白质之间的相互作用。但也基于此点，免疫共沉淀并不能显示蛋白质之间的相互作用是直接还是 ...

为什么我要评分时总是显示“当前回帖不是应助回帖，你不能对此进行金币奖励”？
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3楼2011-05-12 15:12:37
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dazhanhongtu

新虫 (初入文坛)
请问做IP时，我猜测目的蛋白A和待检测蛋白B有相互作用，a b被纯化后跑电泳，之后敷A的抗体，是不是还要敷B的抗体，拍照后显示的是两条带还是一条带？

IP正确的应该是几条带？
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5楼2011-12-13 15:24:01
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vetzhangshen

铁虫 (初入文坛)
那GST-Pull down可以反映细胞内某两种蛋白发生的结合么？
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7楼2012-02-22 10:53:59
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神经生物

新虫 (初入文坛)
一定程度上可以反应两种蛋白的结合。但因为在体内它们不一定空间上有碰到，所以并不意味着在生理条件下一定结合。
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8楼2012-03-20 21:06:56
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随意的飘雪

铁虫 (小有名气)
最近也一直在了解，虫友们知道哪个地方有做pulldown的吗
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9楼2012-08-13 12:09:53
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普通回帖

yicao917

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yicao917 at 2011-05-12 15:12:37:
为什么我要评分时总是显示“当前回帖不是应助回帖，你不能对此进行金币奖励”？

20分都给他吧
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4楼2011-05-15 21:53:10
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btx362237729

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cdl007 at 2011-05-08 14:08:42:
免疫共沉淀实验由于在非变性实验条件性进行，这样蛋白质之间的天然相互作用得以最大程度的保留，因此可以比较真实的反应蛋白质之间的相互作用。但也基于此点，免疫共沉淀并不能显示蛋白质之间的相互作用是直接还是 ...

学习了 非常感谢
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人生最黑暗的时光终于过去了
6楼2011-12-13 19:04:40
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zuibangmajun
10楼2012-09-24 17:13:49
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