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yicao917木虫 (小有名气)
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免疫共沉淀和GST pull down技术各有何优势
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| 本人第一次涉足蛋白组学的研究，请教各位大侠免疫共沉淀和GST pull down技术各有何优势？ |
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 【分子生物】EPI帖 | 实验操作 | 实验技术 |
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cdl007
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免疫共沉淀实验由于在非变性实验条件性进行，这样蛋白质之间的天然相互作用得以最大程度的保留，因此可以比较真实的反应蛋白质之间的相互作用。但也基于此点，免疫共沉淀并不能显示蛋白质之间的相互作用是直接还是间接的，因为通过目的蛋白抗体共沉淀下来的是一个蛋白复合物，而不仅仅是和目的蛋白直接相互作用的蛋白。而GST-Pull down实验可以通过体外实验条件，去除其它蛋白的影响，从而确定目的蛋白和待检测蛋白是否可以发生直接相互作用。GST亲和层析和GST Pull-down方法的基本原理是：利用重组技术将探针蛋白与GST（Glutathione S transferase）融合，融合蛋 白通过GST与固相化在载体上的GTH（Glutathione） 亲和结合。因此，当与融合蛋白有相互作用的蛋白 通过层析柱时或与此固相复合物混合时就可被吸 附而分离。 |
2楼2011-05-08 14:08:42
yicao917
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yicao917
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