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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 【求助/交流】PCR阴性对照总有扩增产物 都有哪些可能？
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nankou2008

铁杆木虫 (著名写手)

肥南瓜

[交流] 【求助/交流】PCR阴性对照总有扩增产物 都有哪些可能？

做荧光实时定量PCR  一个样品的NTC， 即无模板的阴性对照 总是有扩增曲线出来 请有经验的虫虫出来交流下 这种情况都有哪些可能？

PS： 刚开始以为是引物被污染了  或者操作过程 污染 ，后来重新定制引物  还是一样的结果 ，应该可以排除是污染的情况。
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湖深而静溪浅而鸣
1楼 2010-08-12 20:11:58
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mafang68

金虫 (著名写手)
★ ★
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-13 05:39:39
nankou2008(金币+2):谢谢 2010-08-13 08:22:49
还是污染问题，你只排除了引物，但是MIX，水等是否污染未知。你可从五方面一一排除，人员，物料来源，操作环境，仪器设备以及操作方法。如果实验室仅你自己出现此情况，那么需从自身找原因，其他像做实验时需带手套等也需注意。呵呵，我知道的就这么多了
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木虫啦，哈哈
2楼2010-08-12 21:41:40
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nankou2008

铁杆木虫 (著名写手)

肥南瓜
引用回帖:
Originally posted by mafang68 at 2010-08-12 21:41:40:
还是污染问题，你只排除了引物，但是MIX，水等是否污染未知。你可从五方面一一排除，人员，物料来源，操作环境，仪器设备以及操作方法。如果实验室仅你自己出现此情况，那么需从自身找原因，其他像做实验时需带手 ...

我只有一个样品出现这样的问题了，都是我一个人操作的，其它样品是好的，所以人员，操作环境，仪器，方法的问题应该不是，物料来源，除了模板引物，其它的成分用在别的样品也都是好的，是不是可以排除物料的原因？并且多次重复都是如此…… 唉很郁闷 这个样品好难伺候啊 不知引物自身在没有模板的情况下，还有什么可能能扩出东西来，百思不得其解啊……
谢谢！
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湖深而静溪浅而鸣
3楼2010-08-13 08:28:11
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mafang68

金虫 (著名写手)
发个你做的引物扩增图，先看看
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木虫啦，哈哈
4楼2010-08-13 23:05:42
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足下客

木虫 (正式写手)
★ ★
lstt09nk(金币+2):鼓励交流，欢迎常来~~ 2010-08-14 09:57:43
nankou2008(金币+2):现在就是怀疑引物的问题了，可是想不通的是，引物怎么样才会出现这样的结果呢？ 呵呵 谢谢！ 2010-08-15 09:48:26
做PCR用的Mix很可能被污染了，要么就是你用的水不行，我都是用双蒸水，要非常干净的才行，阴性对照几乎没有P出条带来过，再就是你用的枪头了，或者是引物设计的有问题。如过污染都可以排除的话，那就是引物有问题了
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5楼2010-08-14 08:48:44
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黑妞儿

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 足下客 at 2010-08-14 08:48:44
做PCR用的Mix很可能被污染了，要么就是你用的水不行，我都是用双蒸水，要非常干净的才行，阴性对照几乎没有P出条带来过，再就是你用的枪头了，或者是引物设计的有问题。如过污染都可以排除的话，那就是引物有问题了

如果用的是试剂盒，阴性对照有扩增曲线是什么原因呢？
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6楼2014-02-13 16:18:59
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by nankou2008 at 2010-08-13 08:28:11
我只有一个样品出现这样的问题了，都是我一个人操作的，其它样品是好的，所以人员，操作环境，仪器，方法的问题应该不是，物料来源，除了模板引物，其它的成分用在别的样品也都是好的，是不是可以排除物料的原因 ...

阳性样品的气溶胶污染阴性样品
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7楼2014-02-14 11:02:16
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