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[求助]
菜鸟求助：PCR扩增和扩增产物的克隆？？
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书上如是说：在许多研究中,需要将PCR产物克隆,以获得目的DNA片段。 我不明白的地方是，要获得目的DNA片段就是通过PCR。PCR的产物就是DNA片段，要将产物克隆就是要获得更多的片段，继续PCR不就行了么？？ 我理解的是PCR的产物中只有两条模板链是长的，其他的都是短的对吗？可以P出与模板链一样长的链吗？？ 菜鸟问题，大虾见笑 |
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cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
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2楼2013-07-03 00:28:19
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4楼2013-07-04 13:54:51
【答案】应助回帖
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kx444555: 金币+3, 鼓励新虫交流 2013-07-09 13:06:06
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cly2810: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2013-07-09 16:42:41
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关于你的这段话的2个问题： 1 PCR就是对目的DNA的富集过程。如果只想做多态性研究就不必做克隆，但以下情况需要你做克隆：a:要测序的目的片段较短，需要连到载体克隆后测序；b:认为目的基因内存在杂合位点，碱基的缺失和突变等情况；c:下一步试验的需要，比如需要对目的基因进行功能研究 ; 2 既然PCR是目的DNA富集的过程，经过30轮左右的指数定增过程，最终PCR产物中都是您的目的DNA大小的DNA片段。 |
5楼2013-07-08 16:24:52
【答案】应助回帖
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-07-09 13:06:15
cly2810: 金币+1, ★有帮助 2013-07-09 16:42:51
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cly2810: 金币+1, ★有帮助 2013-07-09 16:42:51
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"我理解的是PCR的产物中只有两条模板链是长的，其他的都是短的对吗？可以P出与模板链一样长的链吗？？" 除了模板还是原来那么长（排除在反应中被降解的理想情况下），还会以线性增长扩增一头是引物，一头是一直延伸超过目的片段长度的，如果延伸温度足够长，会一直延伸到比较复杂的结构为止，然后是以指数增长扩增的两头是引物的目的产物，估计就是你说的短的产物。 一般的PCR用聚合酶不能进行超长片段扩增，不过，如果模板本身是PCR产物，再次PCR是有可能扩增到模板那么长的，按理论说是完全有可能，但实际试验操作时，还是要进行摸索，主要是PCR产物非特异性扩增的条带以及其他原因抑制扩增，通常需要做不同稀释倍数的摸索。 |
6楼2013-07-09 08:05:23
7楼2013-10-10 16:09:26
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