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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 天根公司的Long Taq DNA Polymerase的PCR扩增产物是平末端还是带A尾巴？
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free-fish

铜虫 (正式写手)

[求助] 天根公司的Long Taq DNA Polymerase的PCR扩增产物是平末端还是带A尾巴？

请问各位虫友，有谁用过天根公司的Long Taq DNA Polymerase（http://www.tiangen.com/newEbiz1/ ... RefreshParent=false），它扩增的PCR产物是平末端，还是带A尾巴，谢谢！！！
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空谷幽风

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1楼 2011-07-24 14:59:08
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gwbk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

free-fish(金币+5): 谢谢 2011-07-24 17:11:24
amisking: 2011-07-24 19:27:13
带A尾巴的3‘-5’外切酶活性的Tag酶，带A尾巴的3‘-5’外切酶活性的Tag酶，PCR 产物可直接进行T/A 载体克隆，如需提高克隆效率，建议先纯化，加A 后再进行T/A 载体克隆。

附带：说明书
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2楼2011-07-24 15:21:00
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-24 19:27:23
有5’-3’外切核酸酶活性和3’-5’外切酶活性。PCR产物可直接进行TA载体克隆，如需提高克隆效率，建议先纯化，加A后再进行TA载体克隆。
带A尾巴的
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2011-07-24 15:50:28
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free-fish

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by gwbk at 2011-07-24 15:21:00:
带A尾巴的3‘-5’外切酶活性的Tag酶，带A尾巴的3‘-5’外切酶活性的Tag酶，PCR 产物可直接进行T/A 载体克隆，如需提高克隆效率，建议先纯化，加A 后再进行T/A 载体克隆。

附带：说明书

既然带A尾巴，那为什么纯化后还要加A再进行T/A克隆呢？我不是很明白，麻烦帮我解释一下，谢谢！
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4楼2011-07-24 17:07:58
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free-fish

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-07-24 15:50:28:
有5’-3’外切核酸酶活性和3’-5’外切酶活性。PCR产物可直接进行TA载体克隆，如需提高克隆效率，建议先纯化，加A后再进行TA载体克隆。
带A尾巴的

既然带A尾巴，那为什么纯化后还要加A再进行T/A克隆呢？我不是很明白，麻烦帮我解释一下，谢谢！
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5楼2011-07-24 17:09:00
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
说明书上说如需提高克隆效率，建议先纯化再加A，不过扩出来的片段本身就有A了，可以直接做TA克隆，一般来讲，直接连T载体的话效率不会很低的，我们平时都用最普通的Taq酶扩片段做TA克隆，效率还蛮高的
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free-fish
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
6楼2011-07-24 17:26:53
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free-fish

铜虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-07-24 17:26:53:
说明书上说如需提高克隆效率，建议先纯化再加A，不过扩出来的片段本身就有A了，可以直接做TA克隆，一般来讲，直接连T载体的话效率不会很低的，我们平时都用最普通的Taq酶扩片段做TA克隆，效率还蛮高的

你好！
谢谢回复。刚刚从网上查得具有3'→5'外切活性DNA聚合酶，在末端不会加A。像Pfu。所以，这样的酶扩增出来的PCR产物本身是不含A的。不知我的理解是否正确？谢谢探讨！
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7楼2011-07-24 17:46:47
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
楼主很有爱心哦，表扬一下
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
8楼2011-07-24 17:49:48
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
带A尾巴
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jiayoubashaonian
9楼2011-07-24 18:00:51
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