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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 谁用过2*Taq MasterMix（含染料）做pcr
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 谁用过2*Taq MasterMix（含染料）做pcr 已有10人参与

想问问这酶的效果怎么样，可不可以p出3000bp的片段呢，因为现在实验出于摸索阶段，这酶比较便宜，可以大量使用，但是不知道效果怎么样，p了几次都没有得到3000bp的片段
  求破，对了 这个是康为世纪的试剂

[ Last edited by xzx018 on 2012-4-18 at 19:31 ]
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1楼 2012-04-18 19:28:41
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

starseacow

专家顾问 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主的PCR条件呢？延伸时间是否足够？康为世纪所用的Taq DNA Polymerase的扩增效率为1 kb/30 s，楼主在PCR时应当每循环保证至少一分半的延伸时间
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
4楼2012-04-18 21:14:15
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snowdeshijie

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主，把你的PCR条件列出来吧，大家帮你分析分析
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5楼2012-04-19 08:32:26
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普通回帖

zh10008100

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们实验室也用的这个，是可以的，P完了可以直接跑电泳的
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2楼2012-04-18 19:57:33
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zh10008100 at 2012-04-18 19:57:33:
我们实验室也用的这个，是可以的，P完了可以直接跑电泳的

你们p过3000bp以上的吗

[ Last edited by xzx018 on 2012-4-20 at 09:04 ]
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3楼2012-04-18 21:06:59
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fwks3518

木虫 (正式写手)
★
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3k以上片段建议使用2*Lamp mix，同样也是康为世纪的
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6楼2012-04-19 08:51:52
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2012-04-18 21:14:15:
楼主的PCR条件呢？延伸时间是否足够？康为世纪所用的Taq DNA Polymerase的扩增效率为1 kb/30 s，楼主在PCR时应当每循环保证至少一分半的延伸时间

预变性 94℃ 2min
变性94℃  30s
退火：50-70℃梯度 30s
延伸 72℃ 2min
最终延伸72℃ 2min
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7楼2012-04-19 09:04:43
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by fwks3518 at 2012-04-19 08:51:52:
3k以上片段建议使用2*Lamp mix，同样也是康为世纪的

我的基本刚好是3000bp左右  实验室好像没你说的那个酶 ，现在做的是简并引物 所以也不知道是引物的原因还是PCR的原因
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8楼2012-04-19 09:06:04
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fwks3518

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by xzx018 at 2012-04-19 09:04:43:
预变性 94℃ 2min
变性94℃  30s
退火：50-70℃梯度 30s
延伸 72℃ 2min
最终延伸72℃ 2min

3k片段延伸之间至少要3min，最终延伸也要5min以上
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9楼2012-04-19 09:39:57
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sxxuan

金虫 (著名写手)
★
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正在用,不过是捷瑞的.效果还没看出来,因为我P的片断都还没拿到
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你的日子如何，你的力量也必如何！
10楼2012-04-19 10:26:51
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