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yc652090251

金虫 (小有名气)

[求助] KOD和Taq酶的PCR产物为什么不一样?请各位高手指点一下! 已有2人参与

我的克隆模板是苏云金芽胞杆菌的基因组,之前用Taq Mix P出的一个1400左右的基因,之后为了连接平末端表达载体,又用KOD酶PCR可是P出的片段测序结果跟我的基因根本对不上号。我将两种PCR产物跑了电泳,条带也不一样大,KOD的产物稍微大点。
请问各位这是为什么呢?
我又该怎么做才能解决这个问题呢?
谢谢大家!
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低调做人好么~~
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yc652090251

金虫 (小有名气)

哎呀~木有人理我!呜呜
低调做人好么~~
2楼2013-06-21 23:50:17
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新人小玥

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yc652090251: 金币+3, ★★★很有帮助, 哎,我再重新验证一下吧。 2013-06-22 10:56:36
体系用的没问题?程序也没错?KOD的延伸温度是68,体系也咋不一样哦!
如果这样的话,Taq所P出来的就是你想要的么?
我所用的KOD一般都很好,Taq能出来的KOD都能出来。而且你的基因也很短,一般没理由啊。。。。
3楼2013-06-22 00:58:51
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
yc652090251: 金币+1, 有帮助, 是的呢。现在就是找不出原因呀。 2013-06-23 09:05:43
我觉得KOD比TAQ好,他是高保真的呀,至于为什么P不出,是不是试验问题呢。不清楚哎。至于理论产物。TAQ的产物会多一个A吧,KOD不会。
4楼2013-06-22 17:09:07
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天猫天猫

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

KOD酶扩增时的复兴温度比Taq酶高大约5℃
5楼2013-12-23 23:24:56
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nes517

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

PCR产物离子浓度不同,即便相同大小的产物,其跑胶条带也不相同,离子浓度大,DNA跑得快些。
有奖励没?
6楼2015-04-14 16:26:59
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nes517

新虫 (初入文坛)

发错了 sorry
7楼2015-04-14 16:28:30
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