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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » KOD和Taq酶的PCR产物为什么不一样？请各位高手指点一下！
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yc652090251

金虫 (小有名气)

[求助] KOD和Taq酶的PCR产物为什么不一样？请各位高手指点一下！ 已有2人参与

我的克隆模板是苏云金芽胞杆菌的基因组，之前用Taq Mix P出的一个1400左右的基因，之后为了连接平末端表达载体，又用KOD酶PCR可是P出的片段测序结果跟我的基因根本对不上号。我将两种PCR产物跑了电泳，条带也不一样大，KOD的产物稍微大点。
请问各位这是为什么呢？
我又该怎么做才能解决这个问题呢？
谢谢大家！
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低调做人好么~~
1楼 2013-06-21 23:21:24
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yc652090251

金虫 (小有名气)
哎呀~木有人理我！呜呜
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低调做人好么~~
2楼2013-06-21 23:50:17
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新人小玥

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yc652090251: 金币+3, ★★★很有帮助, 哎，我再重新验证一下吧。 2013-06-22 10:56:36
体系用的没问题？程序也没错？KOD的延伸温度是68，体系也咋不一样哦!
如果这样的话，Taq所P出来的就是你想要的么？
我所用的KOD一般都很好，Taq能出来的KOD都能出来。而且你的基因也很短，一般没理由啊。。。。
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3楼2013-06-22 00:58:51
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yc652090251: 金币+1, ★有帮助, 是的呢。现在就是找不出原因呀。 2013-06-23 09:05:43
我觉得KOD比TAQ好，他是高保真的呀，至于为什么P不出，是不是试验问题呢。不清楚哎。至于理论产物。TAQ的产物会多一个A吧，KOD不会。
赞一下 回复此楼
4楼2013-06-22 17:09:07
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天猫天猫

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

KOD酶扩增时的复兴温度比Taq酶高大约5℃
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5楼2013-12-23 23:24:56
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nes517

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

PCR产物离子浓度不同，即便相同大小的产物，其跑胶条带也不相同，离子浓度大，DNA跑得快些。
有奖励没？
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6楼2015-04-14 16:26:59
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nes517

新虫 (初入文坛)
发错了 sorry
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7楼2015-04-14 16:28:30
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