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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr出现问题是KOD DNA聚合酶的问题，还是缓冲体系与pcr反应条件的问题？
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zhoubin0823

木虫 (小有名气)

[求助] pcr出现问题是KOD DNA聚合酶的问题，还是缓冲体系与pcr反应条件的问题？ 已有2人参与

最近在做KOD DNA聚合酶的重组表达，将买来的KOD-PET15b的KOD DNA聚合酶基因重组到PET28a上，构建KOD-Pet28a重组质粒，以表达带有组氨酸标签的KOD DNA聚合酶,实验结果验证重组的基因没问题，KOD DNA聚合酶也能表达、纯化，但是在利用所纯化的酶PCR后跑核酸电泳（pcr的体系与条件按照商业酶的说明书的条件进行），pcr出来的目的条带刚开始是有的，随着时间的进行，后面跑核酸电泳没有核酸条带，请教高手，可能在哪里出现问题了？
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1楼 2015-01-05 14:42:50
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puresnowlqin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-05 15:28:28
“pcr出来的目的条带刚开始是有的，随着时间的进行，后面跑核酸电泳没有核酸条带。”过了很久么？PCR好的东西要放冰箱保存，室温放着就容易降解了。
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最喜欢的就是最好的。
2楼2015-01-05 15:19:02
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kuaile5420

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
随着时间的进行时什么意思呀？
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坚持到底就是胜利！
3楼2015-01-05 22:37:51
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zhoubin0823

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kuaile5420 at 2015-01-05 22:37:51
随着时间的进行时什么意思呀？

pcr一般是30循环，30min左右，我的意思是pcr进行10min左右，跑电泳有弥散的条带，继续pcr进行30min后，跑电泳就什么都没有了
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4楼2015-01-06 15:46:03
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zhoubin0823

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by puresnowlqin at 2015-01-05 15:19:02
“pcr出来的目的条带刚开始是有的，随着时间的进行，后面跑核酸电泳没有核酸条带。”过了很久么？PCR好的东西要放冰箱保存，室温放着就容易降解了。

不是pcr完后保存很久的时间，而是pcr进行10个循环后跑电泳有弥散的条带，pcr进行30个循环后跑电泳什么都没有了
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5楼2015-01-06 15:48:47
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