| 查看: 8881 | 回复: 7 | |||
liuyan_54321新虫 (初入文坛)
|
[求助]
3个片段的重叠延伸pcr,pcr反应条件？
|
| 最近我在做3个片段的重叠延伸pcr，对于3个片段的重叠延伸时的pcr反应条件应该怎么设置，还有我使用的是50ul的体系，模板量加多少比较好，期待各位高手的协助，谢谢 |
回复此楼» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有246人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 为什么相同的PCR反应条件，在不同的pcr仪上跑的时间不同？？？
已经有12人回复
- 求关于Overlap PCR(重叠延伸PCR)的具体实验过程及原理
已经有10人回复
- 求助-4Kb的基因P不出来
已经有37人回复
- 5kb大片段PCR扩增求助
已经有18人回复
- 重叠延伸PCR第一轮做出来了，但是第二轮P不出来
已经有29人回复
- 求助重叠延伸pcr
已经有5人回复
- 3个片段的重叠pcr能否一步到位？
已经有11人回复
- 两段平端PCR产物的直接相连
已经有10人回复
- 重叠延伸PCR引物合成求助
已经有15人回复
- overlap PCR做不出来呐。。。。
已经有23人回复
- 高GC含量基因片段PCR问题
已经有13人回复
- 重叠PCR应该怎么做？
已经有9人回复
- 基因组中长片段PCR应该注意的几个问题
已经有14人回复
- 重叠延伸PCR设计引物
已经有3人回复
- 重叠PCR克隆大片段
已经有4人回复
- 重叠pcr\跳跃pcr的问题
已经有14人回复
- 如何设计重叠延伸PCR引物
已经有14人回复
- PCR总是无法正确扩增所需片段，问题在哪？
已经有6人回复
- 【求助/交流】重叠PCR问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】重叠PCR相关问题。
已经有8人回复
- 【求助/交流】重叠延伸pcr第二轮条带较弱，弥散
已经有12人回复
liygmail
至尊木虫 (职业作家)
- MolEPI: 1
- 应助: 31 (小学生)
- 金币: 14358.9
- 红花: 5
- 帖子: 3410
- 在线: 820.4小时
- 虫号: 280786
- 注册: 2006-09-17
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-04-23 14:14:52
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-04-23 14:14:52
| 三片段融合pcr，退火温度取决于外引物以及内引物重叠区Tm值，可以温度梯度优化，根据所用的DNA聚合酶扩增速度设定延伸时间，模板100-200ng，其中三片段摩尔比保持1:1:1，加入外引物，扩增30-35个循环 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
liuyan_543212楼2013-04-20 17:12:28
munificent
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 19
- 红花: 1
- 帖子: 6
- 在线: 9.6小时
- 虫号: 798621
- 注册: 2009-06-25
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2013-04-23 14:15:13
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2013-04-23 14:15:13
|
刚做了10个片段的overlap pcr，非常顺利。 方法可参考Nat Protoc. 2006;1(2):791-7. PCR-based accurate synthesis of long DNA sequences. 文章里用overlap pcr将小片段组装成较大的片段。 个人感觉片段割胶回收后，在体系里每个片段加20纳克就足够了。 片段之间的overlap至少要有20bp，在50-55度退火。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
3楼2013-04-20 20:06:46
liuyan_54321
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 8.8
- 红花: 1
- 帖子: 9
- 在线: 3.7小时
- 虫号: 1138678
- 注册: 2010-11-04
- 专业: 病毒、病毒感染与宿主免疫
4楼2013-04-23 11:38:56
liuyan_54321
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 8.8
- 红花: 1
- 帖子: 9
- 在线: 3.7小时
- 虫号: 1138678
- 注册: 2010-11-04
- 专业: 病毒、病毒感染与宿主免疫
5楼2013-04-23 11:40:07
liuyan_54321
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 8.8
- 红花: 1
- 帖子: 9
- 在线: 3.7小时
- 虫号: 1138678
- 注册: 2010-11-04
- 专业: 病毒、病毒感染与宿主免疫
，去找这篇文章了，可是需要购买才能看到，
6楼2013-04-23 11:47:02
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24338.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
7楼2013-04-23 14:18:59
xmckyltwx
木虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2530.8
- 红花: 1
- 帖子: 419
- 在线: 149.6小时
- 虫号: 1093954
- 注册: 2010-09-09
- 性别: MM
- 专业: 器官移植与移植免疫
8楼2013-06-14 16:02:11
