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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：T4 DNA Polymerase的反应体系以及反应条件~非常感谢··急急急急急急急急~
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taojun

木虫 (著名写手)

[求助] 求助：T4 DNA Polymerase的反应体系以及反应条件~非常感谢··急急急急急急急急~

我现在需要用T4聚合酶将我的PCR产物从3‘到5’外切至第一个核苷酸A的位置，哪个专家能告诉我反应体系多少比较合适？加dATP，酶，buffer的比例是多少？还有就是反应时间和温度大概多少 非常感谢~非常感谢！！！！
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1楼2011-08-11 09:53:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dahhs

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-08-11 18:09:22
taojun(金币+4): 谢谢你的及时回复~ 2011-08-12 10:46:24
taojun(金币+2): 2011-09-11 22:45:10
要看你的T4连接酶是哪家公司的，说明书上有详细的反应条件，dATP 一般1ul .
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2楼2011-08-11 10:08:16
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taojun

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dahhs at 2011-08-11 10:08:16:
要看你的T4连接酶是哪家公司的，说明书上有详细的反应条件，dATP 一般1ul .

我用的是takara的酶~说明书上给的反应体系是片段末端平滑化的例子，跟我的实验目的不一样啊~
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3楼2011-08-11 10:13:38
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
不懂，帮顶下，顺带学习下
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4楼2011-08-11 22:30:02
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taojun

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-08-11 22:30:02:
不懂，帮顶下，顺带学习下

谢谢~嘿嘿
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5楼2011-08-12 10:45:27
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JASON13

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): Good 2011-08-12 18:26:53
taojun(金币+4): 谢谢~我先试试哦 2011-08-19 10:29:45
我用的是NEB的，如下。
     T4 DNA聚合酶处理：按下表操作，混匀后 20-25 度放置 30min，然后 75 度水浴20min，使 T4 DNA聚合酶失活，此时可存于-20 度备用。
赞一下(2人) 回复此楼
结构化生
6楼2011-08-12 17:39:51
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jackiewho

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by JASON13 at 2011-08-12 17:39:51
我用的是NEB的，如下。
     T4 DNA聚合酶处理：按下表操作，混匀后 20-25 度放置 30min，然后 75 度水浴20min，使 T4 DNA聚合酶失活，此时可存于-20 度备用。

表呢？
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7楼2015-05-17 19:52:05
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远方天空

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by JASON13 at 2011-08-12 17:39:51
我用的是NEB的，如下。
     T4 DNA聚合酶处理：按下表操作，混匀后 20-25 度放置 30min，然后 75 度水浴20min，使 T4 DNA聚合酶失活，此时可存于-20 度备用。

亲，能发一下你添加的那个表吗？

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8楼2017-01-06 23:35:31
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