应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DNA片段连接的温度和反应条件
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
81/1返回列表
查看: 2712  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wangdandelia

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】DNA片段连接的温度和反应条件 已有5人参与

DNA连接反应的温度和条件各是多少啊？上网也没查到相关的具体说明，比如说：
1. 粘末端之间的连接体系和反应条件；
2， 平末端之间的连接体系和反应条件；
3，载体与大片段之间的连接体系和反应条件；
4， 载体与小片段之间的连接体系和反应条件。

听说是4摄氏度适用于任何片段的连接，可是我觉得4摄氏度温度太低，那样的话分子的运动也缓慢，不适合连接啊。

我用的是NEB公司的 T4 DNA 连接酶。

[ Last edited by wangdandelia on 2010-11-19 at 10:46 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-11-18 22:33:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiabei6131

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你用的是哪个公司的连接酶呢？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-11-18 23:28:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yqhc

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
4度可以的，时间可长些
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-11-19 07:44:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangy0908

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):是的 2010-11-19 10:50:46
具体的连接酶有具体的要求的！你看看你用的连接酶的使用说明的。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-11-19 08:22:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangdandelia

木虫 (正式写手)
我用的是 NEB T4 DNA 连接酶
引用回帖:
Originally posted by jiabei6131 at 2010-11-18 23:28:00:
你用的是哪个公司的连接酶呢？

赞一下 回复此楼
5楼2010-11-19 10:46:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

skkyy88888

铜虫 (著名写手)
温度一般16-22度之间。时间可以过夜。
赞一下 回复此楼
6楼2010-11-19 12:02:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiabei6131

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-11-23 23:39:48
引用回帖:
Originally posted by wangdandelia at 2010-11-19 10:46:02:
我用的是 NEB T4 DNA 连接酶



T4说明书上这样写的：
为方便起见，连接反应可以在室温（20-25 ℃）条件下进行。粘性末端连接：在 20 μl反应体系中加入 1 μl T4 DNA 连接酶，反应 10 分钟。平齐末端连接：在 20 μl 反应体系中加入 1 μl T4 DNA连接酶反应 2 小时，或者加入 1 μl 高浓度 T4 DNA 连接酶反应 10 分钟。

NEB 快速连接试剂盒 [NEB #M2200S（30 次反应），或 NEB #M2200L（150 次反应）] 可在室温下 5 分钟内完成平齐和粘性末端的连接。

NEB的酶我一般是用16度连接过夜，没啥问题的。
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2010-11-23 20:44:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangdandelia

木虫 (正式写手)
好的，谢谢各位大侠！
引用回帖:
Originally posted by jiabei6131 at 2010-11-23 20:44:04:

T4说明书上这样写的：
为方便起见，连接反应可以在室温（20-25 ℃）条件下进行。粘性末端连接：在 20 μl反应体系中加入 1 μl T4 DNA 连接酶，反应 10 分钟。平齐末端连接：在 20 μl 反应体系中加入 1 μl T ...

赞一下 回复此楼
8楼2010-11-23 21:31:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wangdandelia 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂，一志愿厦门大学，生物与医药，总分272，本科211 +3 Electron1cc 2026-04-01 4/200 2026-04-05 20:24 by lys0704
[考研] 材料专硕283求调剂 +14 试试看呗 2026-04-04 15/750 2026-04-05 19:21 by jkddd
[考研] 0855求调剂材料 +10 红桃灼灼 2026-04-04 10/500 2026-04-05 18:08 by 猪会飞
[考研] 275求调剂 +16 waltzh 2026-04-01 16/800 2026-04-05 17:14 by Hdyxbekcb
[考研] 313求调剂 +5 海日海日 2026-04-04 5/250 2026-04-05 15:52 by jndximd
[考研] 081700学硕，323分，一志愿中国海洋大学求调剂学校 +16 披星河 2026-04-04 16/800 2026-04-05 11:27 by 猪会飞
[考研] 数一英一 347 人工智能国奖论文都有求调剂 +3 乌拉儿山脉 2026-03-30 7/350 2026-04-05 10:32 by zhq0425
[考研] 288环境专硕,求调材料方向 +13 lllllos 2026-04-04 14/700 2026-04-04 23:34 by lqwchd
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-04-02 13/650 2026-04-04 23:10 by 无际的草原
[考研] 材料调剂 +10 懒羊羊轻置玉臀 2026-04-02 11/550 2026-04-04 21:56 by laoshidan
[考研] 085600调剂 +4 1amJJ 2026-04-02 4/200 2026-04-04 21:53 by hemengdong
[考研] 296材料专硕求调剂 +21 202451007219 2026-04-02 22/1100 2026-04-04 21:48 by hemengdong
[考研] 考研调剂 +4 美丽的youth_ 2026-04-04 5/250 2026-04-04 17:16 by imissbao
[考研] 085600材料与化工调剂 +26 kikiki7 2026-03-30 27/1350 2026-04-04 09:18 by qlm5820
[考研] 求调剂 +4 15064154688 2026-04-03 5/250 2026-04-03 15:07 by zrongyan
[考研] 一志愿北京交通大学材料工程总分358 +4 cs0106 2026-04-03 4/200 2026-04-03 13:41 by 百灵童888
[考研] 建环，能源，土木老师路过看一看！！！ +5 嘿嘿uu 2026-04-01 5/250 2026-04-03 11:47 by znian
[考研] 262求调剂 +6 励志一定发文章 2026-04-02 7/350 2026-04-03 09:54 by linyelide
[考研] 一志愿北京科技，085601总分305求调剂 +9 半生瓜！ 2026-04-01 11/550 2026-04-02 08:28 by Wang200018
[考研] 江苏苏北高校诚邀调剂同学 +3 zzll406 2026-03-31 3/150 2026-03-31 16:54 by 及时行乐fan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭