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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DNA片段连接的温度和反应条件
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wangdandelia

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】DNA片段连接的温度和反应条件 已有5人参与

DNA连接反应的温度和条件各是多少啊？上网也没查到相关的具体说明，比如说：
1. 粘末端之间的连接体系和反应条件；
2， 平末端之间的连接体系和反应条件；
3，载体与大片段之间的连接体系和反应条件；
4， 载体与小片段之间的连接体系和反应条件。

听说是4摄氏度适用于任何片段的连接，可是我觉得4摄氏度温度太低，那样的话分子的运动也缓慢，不适合连接啊。

我用的是NEB公司的 T4 DNA 连接酶。

[ Last edited by wangdandelia on 2010-11-19 at 10:46 ]
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1楼 2010-11-18 22:33:13
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jiabei6131

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-11-23 23:39:48
引用回帖:
Originally posted by wangdandelia at 2010-11-19 10:46:02:
我用的是 NEB T4 DNA 连接酶



T4说明书上这样写的：
为方便起见，连接反应可以在室温（20-25 ℃）条件下进行。粘性末端连接：在 20 μl反应体系中加入 1 μl T4 DNA 连接酶，反应 10 分钟。平齐末端连接：在 20 μl 反应体系中加入 1 μl T4 DNA连接酶反应 2 小时，或者加入 1 μl 高浓度 T4 DNA 连接酶反应 10 分钟。

NEB 快速连接试剂盒 [NEB #M2200S（30 次反应），或 NEB #M2200L（150 次反应）] 可在室温下 5 分钟内完成平齐和粘性末端的连接。

NEB的酶我一般是用16度连接过夜，没啥问题的。
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7楼2010-11-23 20:44:04
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jiabei6131

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你用的是哪个公司的连接酶呢？
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2楼2010-11-18 23:28:00
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yqhc

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
4度可以的，时间可长些
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3楼2010-11-19 07:44:34
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wangy0908

金虫 (正式写手)
★ ★
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lstt09nk(金币+1):是的 2010-11-19 10:50:46
具体的连接酶有具体的要求的！你看看你用的连接酶的使用说明的。
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4楼2010-11-19 08:22:10
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