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wangdandelia

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】DNA片段连接的温度和反应条件 已有5人参与

DNA连接反应的温度和条件各是多少啊?上网也没查到相关的具体说明,比如说:
1. 粘末端之间的连接体系和反应条件;
2, 平末端之间的连接体系和反应条件;
3,载体与大片段之间的连接体系和反应条件;
4, 载体与小片段之间的连接体系和反应条件。

听说是4摄氏度适用于任何片段的连接,可是我觉得4摄氏度温度太低,那样的话分子的运动也缓慢,不适合连接啊。

我用的是NEB公司的 T4 DNA 连接酶。

[ Last edited by wangdandelia on 2010-11-19 at 10:46 ]
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wangdandelia

木虫 (正式写手)

好的,谢谢各位大侠!
引用回帖:
Originally posted by jiabei6131 at 2010-11-23 20:44:04:

T4说明书上这样写的:
为方便起见,连接反应可以在室温(20-25 ℃)条件下进行。粘性末端连接:在 20 μl反应体系中加入 1 μl T4 DNA 连接酶,反应 10 分钟。平齐末端连接:在 20 μl 反应体系中加入 1 μl T ...

8楼2010-11-23 21:31:36
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jiabei6131

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你用的是哪个公司的连接酶呢?
2楼2010-11-18 23:28:00
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yqhc

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
4度可以的,时间可长些
3楼2010-11-19 07:44:34
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wangy0908

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):是的 2010-11-19 10:50:46
具体的连接酶有具体的要求的!你看看你用的连接酶的使用说明的。
4楼2010-11-19 08:22:10
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