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14125kid

新虫 (初入文坛)

[求助] TAKARA的 T4 DNA 连接酶在室温下多久会失活?如果在16℃下反应多久会失活?

我知道T4 DNA ligase的最佳反应温度是16℃,可以连过夜,那么酶的作用时间大约为多长呢?是只有几个小时还是可以十几个小时一直有作用?
     在加样过程中如果耽误了时间,加了酶的体系在室温下放了十分钟会不会影响酶活?
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-03-18 08:30:42
没用过takara的,一直用的是NEB,不过在室温放十分钟不会影响你的实验结果
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2013-03-17 17:03:35
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wchuangqi

铜虫 (小有名气)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 应助指数-1, 谢谢参与,不过回帖更倾向于交流,而不是应助 2013-03-20 07:52:25
做任何实验之前都要认真阅读产品说明书,严格按照说明书上去做。
天道酬勤
3楼2013-03-18 08:52:34
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-03-20 07:52:39
我们用的TaKaRa的solution 1,一般小片段(<1000bp)6h,长一些的就过夜,16℃。
4楼2013-03-19 09:01:36
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dy_414

木虫 (正式写手)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 应助指数-1, 谢谢参与,不过回答很难理解 2013-03-20 07:53:27
室温啊,找个冰盒吧
我坚信,rp是攒出来的
5楼2013-03-19 22:25:34
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dearzhanglei

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
14125kid: 金币+1, 有帮助 2013-03-20 22:55:51
wizardfan: 金币+2, 鼓励新虫发帖 2013-03-21 08:15:09
我们用的也是TaKaRa的solution 1,冰盒上操作,每次都是4℃过夜。
6楼2013-03-20 08:48:59
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kagamiya

新虫 (初入文坛)

我们用Transgen的,ligase都大同小异。
说明书上说20-25度反应10分钟,我从来都是室温过夜,做克隆一直很顺利。
7楼2013-03-22 23:37:14
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375697868

新虫 (初入文坛)

没有关系,室温放十多分钟是不会影响结果的。
8楼2013-07-27 12:04:15
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Dison8380

铁虫 (小有名气)

看说明书怎么说的吧
如果实际情况的话,目前室温也在16°左右吧
9楼2013-10-28 17:32:46
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lcu0919

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by kagamiya at 2013-03-22 23:37:14
我们用Transgen的,ligase都大同小异。
说明书上说20-25度反应10分钟,我从来都是室温过夜,做克隆一直很顺利。

连接反应,对酶切后的纯度有关吗?
敢想,敢拼!
10楼2013-11-27 13:36:02
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