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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » TAKARA的 T4 DNA 连接酶在室温下多久会失活?如果在16℃下反应多久会失活?
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14125kid

新虫 (初入文坛)

[求助] TAKARA的 T4 DNA 连接酶在室温下多久会失活?如果在16℃下反应多久会失活?

我知道T4 DNA ligase的最佳反应温度是16℃,可以连过夜,那么酶的作用时间大约为多长呢?是只有几个小时还是可以十几个小时一直有作用?
     在加样过程中如果耽误了时间,加了酶的体系在室温下放了十分钟会不会影响酶活?
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1楼 2013-03-17 16:36:45
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-03-18 08:30:42
没用过takara的，一直用的是NEB，不过在室温放十分钟不会影响你的实验结果
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2013-03-17 17:03:35
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wchuangqi

铜虫 (小有名气)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 应助指数-1, 谢谢参与，不过回帖更倾向于交流，而不是应助 2013-03-20 07:52:25
做任何实验之前都要认真阅读产品说明书，严格按照说明书上去做。
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天道酬勤
3楼2013-03-18 08:52:34
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-03-20 07:52:39
我们用的TaKaRa的solution 1，一般小片段（<1000bp）6h，长一些的就过夜，16℃。
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4楼2013-03-19 09:01:36
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dy_414

木虫 (正式写手)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 应助指数-1, 谢谢参与，不过回答很难理解 2013-03-20 07:53:27
室温啊，找个冰盒吧
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我坚信，rp是攒出来的
5楼2013-03-19 22:25:34
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dearzhanglei

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
14125kid: 金币+1, ★有帮助 2013-03-20 22:55:51
wizardfan: 金币+2, 鼓励新虫发帖 2013-03-21 08:15:09
我们用的也是TaKaRa的solution 1，冰盒上操作，每次都是4℃过夜。
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6楼2013-03-20 08:48:59
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kagamiya

新虫 (初入文坛)
我们用Transgen的，ligase都大同小异。
说明书上说20-25度反应10分钟，我从来都是室温过夜，做克隆一直很顺利。
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7楼2013-03-22 23:37:14
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375697868

新虫 (初入文坛)
没有关系，室温放十多分钟是不会影响结果的。
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8楼2013-07-27 12:04:15
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Dison8380

铁虫 (小有名气)
看说明书怎么说的吧
如果实际情况的话，目前室温也在16°左右吧
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9楼2013-10-28 17:32:46
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lcu0919

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by kagamiya at 2013-03-22 23:37:14
我们用Transgen的，ligase都大同小异。
说明书上说20-25度反应10分钟，我从来都是室温过夜，做克隆一直很顺利。

连接反应，对酶切后的纯度有关吗？
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敢想，敢拼！
10楼2013-11-27 13:36:02
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