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14125kid

新虫 (初入文坛)

[求助] TAKARA的 T4 DNA 连接酶在室温下多久会失活?如果在16℃下反应多久会失活?

我知道T4 DNA ligase的最佳反应温度是16℃,可以连过夜,那么酶的作用时间大约为多长呢?是只有几个小时还是可以十几个小时一直有作用?
     在加样过程中如果耽误了时间,加了酶的体系在室温下放了十分钟会不会影响酶活?
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kagamiya

新虫 (初入文坛)

我们用Transgen的,ligase都大同小异。
说明书上说20-25度反应10分钟,我从来都是室温过夜,做克隆一直很顺利。
7楼2013-03-22 23:37:14
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-03-18 08:30:42
没用过takara的,一直用的是NEB,不过在室温放十分钟不会影响你的实验结果
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2013-03-17 17:03:35
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wchuangqi

铜虫 (小有名气)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 应助指数-1, 谢谢参与,不过回帖更倾向于交流,而不是应助 2013-03-20 07:52:25
做任何实验之前都要认真阅读产品说明书,严格按照说明书上去做。
天道酬勤
3楼2013-03-18 08:52:34
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-03-20 07:52:39
我们用的TaKaRa的solution 1,一般小片段(<1000bp)6h,长一些的就过夜,16℃。
4楼2013-03-19 09:01:36
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