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taojun

木虫 (著名写手)

[求助] 求助:T4 DNA Polymerase的反应体系以及反应条件~非常感谢··急急急急急急急急~

我现在需要用T4聚合酶将我的PCR产物从3‘到5’外切至第一个核苷酸A的位置,哪个专家能告诉我反应体系多少比较合适?加dATP,酶,buffer的比例是多少?还有就是反应时间和温度大概多少 非常感谢~非常感谢!!!!
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远方天空

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by JASON13 at 2011-08-12 17:39:51
我用的是NEB的,如下。
     T4 DNA聚合酶处理:按下表操作,混匀后 20-25 度放置 30min,然后 75 度水浴20min,使 T4 DNA聚合酶失活,此时可存于-20 度备用。

亲,能发一下你添加的那个表吗?

发自小木虫Android客户端
8楼2017-01-06 23:35:31
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查看全部 8 个回答

dahhs

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


1949stone(金币+1): 鼓励 2011-08-11 18:09:22
taojun(金币+4): 谢谢你的及时回复~ 2011-08-12 10:46:24
taojun(金币+2): 2011-09-11 22:45:10
要看你的T4连接酶是哪家公司的,说明书上有详细的反应条件,dATP 一般1ul .
2楼2011-08-11 10:08:16
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taojun

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dahhs at 2011-08-11 10:08:16:
要看你的T4连接酶是哪家公司的,说明书上有详细的反应条件,dATP 一般1ul .

我用的是takara的酶~说明书上给的反应体系是片段末端平滑化的例子,跟我的实验目的不一样啊~
3楼2011-08-11 10:13:38
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

不懂,帮顶下,顺带学习下
4楼2011-08-11 22:30:02
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