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yingyangyang
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求解：末端补平原理
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| 将DNA超声打断后，形成3’和5’突出末端，用酶和dNTP进行末端补平，形成3’和5’平末端。求解这个具体的原理是怎么样的，这个酶是怎么起作用的，好像是至少有两种酶在起作用。 |
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 二代测序 | 核酸方面 |
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【答案】应助回帖
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Klenow Fragment，又称Klenow片段，是大肠杆菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片断(Large Fragment)。Klenow Fragment保留了DNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5'→3'外切酶活性。Klenow Fragment的3'→5'外切酶活性保证了其合成DNA时的准确性(proofreading)。 特点：对于5'突出或3'突出的粘末端都可以催化产生平末端，用于后续的平端连接。 用途：双链DNA 5'突出(5'overhang)末端的补平(fill-in)；双链DNA 3'突出(3'overhang)的打平(也称削平)；5'突出末端的标记；随机引物法进行DNA标记；Sanger双脱氧法进行DNA测序；cDNA第二链的合成或定点突变反应第二链的合成。 来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为polA 基因片段。 活性定义：37℃30分钟时间内，催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)掺入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。 |
2楼2012-06-05 09:06:54
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