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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求解：末端补平原理
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yingyangyang

木虫 (正式写手)

[求助] 求解：末端补平原理

将DNA超声打断后，形成3’和5’突出末端，用酶和dNTP进行末端补平，形成3’和5’平末端。求解这个具体的原理是怎么样的，这个酶是怎么起作用的，好像是至少有两种酶在起作用。
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1楼 2012-06-04 22:10:02
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yingyangyang

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 足下客 at 2012-06-05 09:06:54
Klenow Fragment，又称Klenow片段，是大肠杆菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片断(Large Fragment)。Klenow Fragment保留了DNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5'→3'外 ...

你知道如何从原核生物提取的RNA中转录得到比较纯单一的small RNA 吗？
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3楼2012-06-06 11:20:27
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足下客

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-06-05 14:07:15
Klenow Fragment，又称Klenow片段，是大肠杆菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片断(Large Fragment)。Klenow Fragment保留了DNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5'→3'外切酶活性。Klenow Fragment的3'→5'外切酶活性保证了其合成DNA时的准确性(proofreading)。
    特点：对于5'突出或3'突出的粘末端都可以催化产生平末端，用于后续的平端连接。
    用途：双链DNA 5'突出(5'overhang)末端的补平(fill-in)；双链DNA 3'突出(3'overhang)的打平(也称削平)；5'突出末端的标记；随机引物法进行DNA标记；Sanger双脱氧法进行DNA测序；cDNA第二链的合成或定点突变反应第二链的合成。
    来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为polA 基因片段。
活性定义：37℃30分钟时间内，催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)掺入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。
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2楼2012-06-05 09:06:54
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足下客

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yingyangyang at 2012-06-06 11:20:27
你知道如何从原核生物提取的RNA中转录得到比较纯单一的small RNA 吗？...

这个没有做个，不懂啊
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4楼2012-06-06 11:21:43
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