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free-fish

铜虫 (正式写手)

[求助] 天根公司的Long Taq DNA Polymerase的PCR扩增产物是平末端还是带A尾巴?

请问各位虫友,有谁用过天根公司的Long Taq DNA Polymerase(http://www.tiangen.com/newEbiz1/ ... RefreshParent=false),它扩增的PCR产物是平末端,还是带A尾巴,谢谢!!!
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gwbk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

free-fish(金币+5): 谢谢 2011-07-24 17:11:24
amisking: 2011-07-24 19:27:13
带A尾巴的3‘-5’外切酶活性的Tag酶,带A尾巴的3‘-5’外切酶活性的Tag酶,PCR 产物可直接进行T/A 载体克隆,如需提高克隆效率,建议先纯化,加A 后再进行T/A 载体克隆。

附带:说明书
2楼2011-07-24 15:21:00
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-24 19:27:23
有5’-3’外切核酸酶活性和3’-5’外切酶活性。PCR产物可直接进行TA载体克隆,如需提高克隆效率,建议先纯化,加A后再进行TA载体克隆。
带A尾巴的
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2011-07-24 15:50:28
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free-fish

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by gwbk at 2011-07-24 15:21:00:
带A尾巴的3‘-5’外切酶活性的Tag酶,带A尾巴的3‘-5’外切酶活性的Tag酶,PCR 产物可直接进行T/A 载体克隆,如需提高克隆效率,建议先纯化,加A 后再进行T/A 载体克隆。

附带:说明书

既然带A尾巴,那为什么纯化后还要加A再进行T/A克隆呢?我不是很明白,麻烦帮我解释一下,谢谢!
4楼2011-07-24 17:07:58
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free-fish

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-07-24 15:50:28:
有5’-3’外切核酸酶活性和3’-5’外切酶活性。PCR产物可直接进行TA载体克隆,如需提高克隆效率,建议先纯化,加A后再进行TA载体克隆。
带A尾巴的

既然带A尾巴,那为什么纯化后还要加A再进行T/A克隆呢?我不是很明白,麻烦帮我解释一下,谢谢!
5楼2011-07-24 17:09:00
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

说明书上说如需提高克隆效率,建议先纯化再加A,不过扩出来的片段本身就有A了,可以直接做TA克隆,一般来讲,直接连T载体的话效率不会很低的,我们平时都用最普通的Taq酶扩片段做TA克隆,效率还蛮高的

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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
6楼2011-07-24 17:26:53
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free-fish

铜虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-07-24 17:26:53:
说明书上说如需提高克隆效率,建议先纯化再加A,不过扩出来的片段本身就有A了,可以直接做TA克隆,一般来讲,直接连T载体的话效率不会很低的,我们平时都用最普通的Taq酶扩片段做TA克隆,效率还蛮高的

你好!
谢谢回复。刚刚从网上查得具有3'→5'外切活性DNA聚合酶,在末端不会加A。像Pfu。所以,这样的酶扩增出来的PCR产物本身是不含A的。不知我的理解是否正确?谢谢探讨!
7楼2011-07-24 17:46:47
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

送鲜花一朵
楼主很有爱心哦,表扬一下
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
8楼2011-07-24 17:49:48
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

带A尾巴
jiayoubashaonian
9楼2011-07-24 18:00:51
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