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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】高保真的taq酶 怎么才能产生polyA尾巴
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助】高保真的taq酶 怎么才能产生polyA尾巴

买了takara的高保真Taq酶 ，但是PCR只能产生平末端产物，连不到T载体上， 怎么才能让PCR产生polyA尾巴呢？
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1楼 2011-04-06 14:35:53
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yabxxh

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
看天(金币+2): 鼓励分享 2011-04-06 18:22:10
我觉得还是全式金的peasyblunt好一点，还配有感受态，以前买的加A反应液都被我丢掉了，怎么感觉有点像广告？呵呵
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4楼2011-04-06 14:57:39
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
看天(金币+2): 鼓励回答 2011-04-06 18:11:00
引用回帖:
Originally posted by xnbioinfor at 2011-04-06 16:20:15:
纯化后是指pcr产物回收后吗？ 光加TAQ酶可以吗？ 不用加buffer 和NTP吗？

如果是走纯化后加Taq，就要加buffer和dATP
如果不纯化直接加Taq，就不用另外加东西
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7楼2011-04-06 17:11:55
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普通回帖

lywinan

捐助贵宾 (职业作家)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
加一点普通Taq酶，再延伸一段时间
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2楼2011-04-06 14:52:56
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
看天(金币+2): 鼓励回答 2011-04-06 18:21:55
可以使用平端克隆试剂盒

也可以纯化PCR产物后加点Taq酶72度孵育10min，再纯化后连接

当然，中间跳掉两次纯化也是可以的，但是TA克隆效率会低一些，具体低多少没有试过
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3楼2011-04-06 14:54:04
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zgb1982

木虫 (正式写手)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
楼上几位都回答了
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5楼2011-04-06 16:08:04
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-04-06 14:54:04:
可以使用平端克隆试剂盒

也可以纯化PCR产物后加点Taq酶72度孵育10min，再纯化后连接

当然，中间跳掉两次纯化也是可以的，但是TA克隆效率会低一些，具体低多少没有试过

纯化后是指pcr产物回收后吗？ 光加TAQ酶可以吗？ 不用加buffer 和NTP吗？
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6楼2011-04-06 16:20:15
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
silicare(EPI+1): 2011-04-20 18:19:20
两种办法
1，用加A试剂。
2，加些普通的TAQ几个循环就完全可以啦。
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8楼2011-04-06 20:30:18
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sai00fuji

金虫 (正式写手)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
有加A的试剂
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9楼2011-04-06 20:53:58
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diaoyuhua

金虫 (小有名气)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
学习了，正考虑这个问题那
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10楼2011-04-07 12:13:09
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 睡着数绵羊 at 2011-04-06 20:30:18:
两种办法
1，用加A试剂。
2，加些普通的TAQ几个循环就完全可以啦。

只延伸不行吗？ 非得再循环几次吗
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11楼2011-04-20 17:25:29
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xnbioinfor at 2011-04-20 17:25:29:
只延伸不行吗？ 非得再循环几次吗

循环数很少的，又不麻烦。
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12楼2011-04-22 10:58:06
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天龙n部

金虫 (小有名气)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
加LA就行了
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13楼2011-04-22 11:04:01
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dhmdddd

木虫 (正式写手)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
宝公司的ExTaq是高保真的酶吧？怎么那次我也连到T载体上面了？难道错了？
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14楼2011-04-25 09:20:47
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sxxuan

金虫 (著名写手)
★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+1): 感谢参与 2011-04-25 20:47:18
加普通Taq酶，担心没有dNTP的话，再加点dNTP，然后72摄氏度延伸1h

效率一般，不过都能得到阳性T克隆
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15楼2011-04-25 13:46:11
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liyu0355

木虫 (正式写手)
★
xnbioinfor(金币+1): 谢谢参与
在PCR反应程序快结束时加Taq酶于72度反应5-10分钟即可.

近期我是用NovoRec®PCR一步定向克隆试剂盒。

构建表达载体.

这个试剂盒不用加A尾，末端有15个相同碱基即可发重组。

详细内容，可自己查相关资料。
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16楼2013-03-13 10:44:59
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履霜

木虫 (正式写手)
★
xnbioinfor(金币+1): 谢谢参与
加A试剂盒，很方便
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17楼2013-03-14 10:53:29
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