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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】高保真的taq酶 怎么才能产生polyA尾巴
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助】高保真的taq酶 怎么才能产生polyA尾巴

买了takara的高保真Taq酶 ，但是PCR只能产生平末端产物，连不到T载体上， 怎么才能让PCR产生polyA尾巴呢？
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1楼 2011-04-06 14:35:53
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liyu0355

木虫 (正式写手)
★
xnbioinfor(金币+1): 谢谢参与
在PCR反应程序快结束时加Taq酶于72度反应5-10分钟即可.

近期我是用NovoRec®PCR一步定向克隆试剂盒。

构建表达载体.

这个试剂盒不用加A尾，末端有15个相同碱基即可发重组。

详细内容，可自己查相关资料。
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16楼2013-03-13 10:44:59
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lywinan

捐助贵宾 (职业作家)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
加一点普通Taq酶，再延伸一段时间
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2楼2011-04-06 14:52:56
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
看天(金币+2): 鼓励回答 2011-04-06 18:21:55
可以使用平端克隆试剂盒

也可以纯化PCR产物后加点Taq酶72度孵育10min，再纯化后连接

当然，中间跳掉两次纯化也是可以的，但是TA克隆效率会低一些，具体低多少没有试过
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-04-06 14:54:04
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yabxxh

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
看天(金币+2): 鼓励分享 2011-04-06 18:22:10
我觉得还是全式金的peasyblunt好一点，还配有感受态，以前买的加A反应液都被我丢掉了，怎么感觉有点像广告？呵呵
赞一下(3人) 回复此楼
4楼2011-04-06 14:57:39
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